麦冬皂苷B通过p38信号通路诱导人骨肉瘤143B细胞凋亡*

陆建红 ， 金益军▲， 叶孝乾， 马 彦， 陈君鑫 ， 黄晓文，3△

（1海警医院检验与病理科，浙江嘉兴314000；2浙江大学医学院附属邵逸夫医院骨科，浙江杭州310020；3嘉兴市中医医院检验科，浙江嘉兴314000）

骨肉瘤是常见的恶性骨肿瘤，病情凶险，好发于儿童及青少年，多发生于肱骨与胫骨近端以及股骨远端［1］，以运动障碍、疼痛和患处肿胀为主要临床症状，且易发生肺转移，五年生存率仅70%左右［2］。传统的治疗方式为手术截肢，对患者的身心造成了极大的负面影响。近年来，尽管新辅助放化疗和介入治疗提高了保肢手术的成功率，但总体生存率仍无显著提高［3］。因此，临床诊疗工作中亟待寻求新型有效的骨肉瘤治疗方案。麦冬皂苷B 在体外能够有效促进肝癌细胞的自噬［4］，也可通过微小RNA-34a（microRNA-34a，miR-34a）调控靶基因Met进而抑制非小细胞肺癌的迁移［5］，能否作用于人骨肉瘤细胞，目前尚无文献报道。本研究通过CCK-8 实验、集落形成实验、细胞凋亡实验、Hoechst 33258 染色、细胞迁移实验及Western blot 法，探讨麦冬皂苷B 抑制人骨肉瘤143B 细胞增殖的作用机制，为骨肉瘤治疗新药的探索提供可参考的理论依据。

材料和方法

1 主要仪器和试剂

垂直电泳仪、转膜仪和Amersham Imager 600 多功能成像系统（GE）；FACScanto II 流式细胞仪（BD）；PHOmo 酶标仪（Autobio）；倒置荧光显微镜（Olympus）；细胞培养箱（Panasonic）。

麦冬皂苷B（纯度＞98%）购自南京泽朗医疗科技有限公司；CCK-8 试剂盒和Hoechst 33258 染液购自大连美仑生物技术有限公司；结晶紫染液购自生工生物工程（上海）股份有限公司；annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒购自BD；Transwell 小室购自Corning；抗cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、GAPDH、p38、p-p38、JNK、p-JNK、ERK 和p-ERK 抗体均购自Cell Signaling Technology。

2 方法

2.1 细胞培养……