三七总皂苷通过激活PI3K/AKT/mTOR 信号通路调控低氧高二氧化碳环境下大鼠PASMCs的自噬和增殖*

陈玲珑， 武垣伶 ， 张 赛 ， 黄丹娜， 王万铁△

（1温州市人民医院急诊医学科，浙江温州325000；2温州医科大学生理学与病理生理学系，浙江温州325035；3山西白求恩医院检验科，山西太原030000）

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一种以肺气流慢性阻塞为特征、会干扰正常呼吸且不能完全逆转的疾病［1］，进一步发展可能导致慢性肺心病的发生。肺动脉高压（pulmonary hypertension，PH）是肺心病的特征性改变，直接影响肺心病的预后，其病理特征是阻塞性血管重构，部分原因是过度的肺动脉平滑肌细胞（pulmonary artery smooth muscle cells，PASMCs）增殖［2］。

三七总皂苷（Panax notoginsengsaponins，PNS）为三七根茎的主要活性成分，主要含有人参皂苷Rg1、人参皂苷 Rb1 及三七皂苷 R1［3］。PNS 具有抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移［4］，减少血小板聚集［5］和抗动脉粥样硬化的作用［6］。但PNS 干预低氧高二氧化碳性肺动脉高压（hypoxic hypercapnia-induced pulmonary hypertension，HHPH）的具体作用机制尤其在涉及到自噬相关通路方面并不是十分明了。因此，本研究以基于磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶 B（protein kinase B，PKB/AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信号通路的细胞自噬为切入点，探讨PNS在低氧高二氧化碳（hypoxia and hypercapnia，HH）环境下对大鼠PASMCs 自噬和增殖的调控作用。

材料和方法

1 细胞和主要试剂及仪器

大鼠PASMCs 购于北京中科质检生物技术有限公司。PNS 购于成都德思特生物技术有限公司；LY294002及兔抗大鼠AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、LC3B、P62 和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）抗体购于MCE；HRP 标记的山羊抗兔IgG 购于Biosharp；高糖DMEM 培养基和胎牛血清购于Gibco；CCK-8 试剂盒购于Dojindo。酶标仪（Bio-Rad）；电泳仪（北京六一仪器厂）；荧光显微镜（Nikon）；蛋白电泳/转膜仪（Bio-Rad）；透射电镜（HITACHI）；化学发光成像仪（上海勤翔科学仪器）。

2 实验方法

2.1 细胞模型的制备及分组 取符合条件的细胞，随机分为5组，饥饿处理 24 h。……