嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpK的原核表达、抗原性分析及抗血浆杀菌作用研究

荣 娜，康 超，孙 薇，简思杰，伍娜娜，刘 祥

(陕西理工大学生物科学与工程学院，中德天然产物研究所，陕西 汉中 723001)

【研究意义】嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)为革兰氏阴性短杆菌，是一种条件性病原菌[1]，主要感染淡水鱼类，引发局部出血和败血症[2-3]，给渔业生产造成巨大经济损失。此外，人类的脑膜炎、胃肠炎和败血症等疾病也和此菌有关[4]。嗜水气单胞菌疾病传统上是用抗生素控制，但长期使用会导致机体药物残留和菌株耐药性等问题[5-6]。疫苗接种作为一种有效策略，已经在大规模商业养殖中发挥了重要作用[7]，但目前还未研制出抗嗜水气单胞菌感染的商用疫苗，大多研究主要集中于实验室研发阶段[8-9]。因此，开发嗜水气单胞菌新型渔用疫苗至关重要。【前人研究进展】外膜蛋白(Outer membrane protein，OMP)是嗜水气单胞菌的毒力因子之一[10]，位于细菌最外层，使得蛋白抗原表位暴露[11]，易被宿主识别为外来物质而激发免疫应答，在嗜水气单胞菌感染的防治中具有重要作用。Khushiramani等[12]用纯化的外膜蛋白OmpTS免疫鲤鱼并制备了滴度较高的抗体，证实该蛋白在鲤鱼体内具有高度的免疫原性。Maiti等[13]利用外膜蛋白OmpW在兔体内制备了抗重组蛋白的多克隆抗体，并证实了抗体的特异性反应。因此，嗜水气单胞菌外膜蛋白有望成为疫苗开发的靶点。【本研究切入点】本研究选取嗜水气单胞菌主要外膜蛋白OmpK为研究对象，对其进行生物信息学分析，分子克隆获得OmpK蛋白的原核表达菌株，探讨其最佳表达条件；纯化获得OmpK蛋白并制备小鼠抗血清；……