车前草饮片标准汤剂的制备与质控探究

王东升

【关键词】麦角新碱;缩宫素;产后出血;治疗效果

车前草是中医临床工作中的常用药材，具有祛痰凉血、清热解毒和利尿等作用，对水肿尿少、痰热咳嗽或臃肿疮毒的患者，可以起到显著的治疗效果[1]。本文详细探讨了车前草饮片标准汤剂的制备与质控方法，以此为车前草在临床治疗工作中更好的应用提供信息参考，具体研究内容如下。

1准备阶段

在制备车前草饮片标准汤剂前，应先准备相关的仪器设备、试剂试药和样品，确保制备工作的顺利开展。仪器主要包括液相色谱仪、分析天平、超声波清洗器和电子天平，试剂试药为大车前对照品和分析纯，样品由四川川村中药材有限公司、北京华邈药业有限公司、亳州市谯城区万事祥中药饮片有限公司、安徽省万生中药饮片有限公司和浙江英特中藥饮片有限公司分别提供。样品共计5个批次，产地分别为重庆、河北、江苏、江西和浙江。

2方法与结果

2.1制备流程

首先选用车前草饮片100g，向其中加入1.2L的水，进行浸泡、回流和过滤处理。其中，浸泡和回流的时间均为30min，过滤时应趁热。

然后向药渣中加入1L的水，再进行回流和过滤处理，本次回流时间控制在20min。最后将两次滤液合并，通过减压浓缩的方式，将滤液缩减为500ml即可。

2.2含量测定

2.2.1色谱分析

利用色谱分析的方式对车前草饮片标准汤剂含量进行测定，首先将浓度为0.1%的甲酸水溶液和乙腈，作为大车前苷对照品和车前草饮片标准汤剂的流动相。并将柱温和流速分别调整为40℃和1ml/min，可检测出波长和进样量为330nm和20μl，确保测定结果的稳定可靠。经测定可得，在该种条件下，供试品溶液中的大车前苷分离效果较好[1]。

2.2.2制备对照品溶液及供试品溶液

选取适量的大车前苷对照品，对其进行称定处理，同时向对照品中加入甲醇，使其成为浓度为2.146μg/ml的对照品溶液。紧接着取1ml的车前草标准汤剂进行摇匀、加25%甲醇、稀释、超声10min、冷却、定容、摇匀和取续滤液的处理，完成供试品溶液的制备工作[2]。

2.2.3线性关系考察

将2ml、4ml、6ml、8ml和10ml的大车前苷对照品溶液，分别放置于10ml的量瓶中，并加入60%的甲醇至刻度，进行适当力度的摇匀处理。然后按照上述的色谱分析方法，测定大车前苷的峰面积，可得进样量为10μl。紧接着将进样量和封面量设为横纵坐标，完成标准曲线的绘制工作。经计算可得出回归方程、R2值和线性范围，分别为：Y=1321707.1X+61.6、0.9998、0.043-0.2146μg。

2.2.4试验

车前草饮片标准汤剂的试验，主要包括精密度试验、重复性试验、稳定性试验和加样回收试验。精密度试验需要选取同一车前草饮片标准汤剂供试品溶液，采用上述的色谱分析方法反复进样6次即可。通过分析可得，供试品溶液中大车前苷的峰面积的RSD为0.61%，此数据代表仪器设备精密度较为良好。

重复性试验需要通过平行制备的方式，将6份车前草饮片标准汤剂供试品溶液按照上述的色谱分析方法进样处理。由此可得，车前草标准汤剂中的大车前苷平均含量和峰面积的RSD，分别为0.27g/L和1.23%，此数据代表该方法重复性较好[3]。

稳定性试验需要选取车前草饮片标准汤剂供试品溶液，在其制备的0h、4h、8h、12h和24h，按照上述的色谱分析方法，分别计算出大车前苷的峰面积的RSD。经测算可得，RSD为2.32%，此数据代表车前草饮片标准汤剂供试品溶液在制备后24小时内效果稳定。

加样回收试验需要先取已知含量的车前草饮片标准汤剂，增加同样容量的大车前苷对照品，并平行制备6份试品，利用上述的色谱分析方法，计算大车前苷的峰面积的RSD和平均加样回收率。经测算可得，这两种数据分别为1.52%和98.55%，表明该方法的准确度较高。

除此之外，再分别选取20μl的对照品溶液和试品溶液，按照上述的色谱分析方法，完成5个批次的样品测定工作，统计每批次样品中大车前苷的含量。

2.3转移率、出膏率及PH

通过公式：汤剂中指标成分含量÷饮片中指标成分含量×100%=转移率，可以得出5批车前草饮片标准汤剂的大车前苷转移率在9.11%-30.42%之间。在计算出膏率时，应先取适量的车前草饮片标准汤剂，依次完成摇匀、水浴蒸干、105℃烘3h和冷却30min处理，对膏体进行称定质量。而PH值则利用PH计测定即可，经计算可得，出膏率在17.35%-25.21%之间，PH值在4.9-5.6之间。

2.4建立指纹图谱

2.4.1色谱条件

色谱条件与上述色谱分析时的各项参数设置一致。

2.4.2制备供试品溶液

供试品溶液的制备方法与上述的制备方法保持一致。

2.4.3试验

该精密度试验的溶液选取、进样次数和操作流程，均与上述的精密度试验保持一致，但以6号峰为参照峰，分别计算出各峰的相对保留时间的RSD和相对峰面积的RSD。经测算可得，相对保留时间RSD<0.41%，相对峰面积RSD<25.43%，这两项数据表示仪器精密度较好。

该重复性试验的溶液选取、进样次数和操作流程，均与上述重复性试验保持一致，也是将6号峰作为参考峰，计算出各峰的相对保留时间的RSD 和相对峰面积的RSD。经测算可得，相对保留时间RSD < 0.31%，相对峰面积RSD < 35.73%，这两项数据表示制备方法重复性较好。

该稳定性试验的溶液选取、进样次数、操作流程和色谱条件，均与上述的稳定性试验保持一致，计算出各峰的相对保留时间的RSD和相对峰面积的RSD。经测算可得，相对保留时间RSD<0.49%，相对峰面积RSD<35.69%，此数据代表车前草饮片标准汤剂供试品溶液在制备后24小时内效果稳定。

除此之外，分别取5个批次的车前草饮片标准汤剂，按照上述的供试品溶液制备方法和色谱分析流程，完成HPLC的记录工作。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，将时间窗设置为0.1，采取中位数法，可以计算出5批车前草饮片标准与对照指纹图谱相似度均>0.74。

3讨论

3.1供试品处理及浓缩前后的考察

供试品处理的考察重点为溶剂浓度和稀释倍数，本次考察的甲醇浓度为25%、50%、75%和100%四种。经研究发现，采用不同浓度和不同稀释倍数的甲醇定容，对大车前苷含量的影响，均无明显差异[2]。但甲醇为有毒物质，故选取25%的甲醇溶液作为供试品的定容浓度，其稀释倍数设定为25倍。通过供试品的制备方法和上述的色谱分析流程，观察浓缩和非浓缩标准汤剂，对大车前苷的具体影响。经研究发现，浓缩处理对大车前苷无任何影响。

3.2切制处理对全草类有效成分的溶出的影响

在5批次车前草饮片标准汤剂中，有2批次样品为未切制状态，将其与剩余3批已切制样品对比，可以发现大车前苷含量和出膏率均明显低于后者。由此可得，切制处理对全草类有效成分的溶出，具有着有利的影响[3]。

3.3相似度低的原因

5组车前草饮片标准汤剂的相似度低的原因，主要由于生产环境、采收时间、加工方式和储藏方式等方面的不同所致。

3.4质量控制

根据《中国药典》筛选车前，选取符合制备标准的5批次车前作为主要材料，通过研究车前的标准汤剂治疗控制方法，可以将大车前苷转移率范围控制在9.11%-30.42%之间，出膏率的范围控制在17.35%-25.21%之间，PH值控制在4.9-5.6之间，使各样品图谱与对照图谱的相似度>0.74。