禽腺病毒血清4型Fiber-2蛋白在大肠杆菌中可溶性表达及其免疫原性分析

耿笑林，王孟月，张翼，刘鹏，李可乐，杜东颖，逄文强，黄玉欣*，田克恭*

(1. 国家兽用药品工程技术研究中心，河南 洛阳 471003；2. 普莱柯生物工程股份有限公司，河南 洛阳 471003)

鸡肝炎-心包积液综合征 (hepatitis-hydropericardium syndrome，HHS)是由禽腺病毒血清4型 (fowl adenovirus serotype 4，FAdV-4)引起的一种高度传染性疾病，该病于1987年在巴基斯坦的安卡拉地区首次暴发，随后在亚洲、欧洲和南美洲等地区流行[1-4]。2015年7月起，由FAdV-4中国流行株引起的HHS在我国山东、河南、安徽和江苏等省份大面积流行[5]，死亡率最高可达80%以上，因为缺乏有效的疫苗进行针对性预防，给我国养禽业带来严重的经济损失。因此，FAdV-4的疫苗研制对防控该病尤为重要。

FAdV-4具有两条纤突，一条长纤突(Fiber-1)和一条短纤突(Fiber-2)，其中Fiber-2蛋白主要是通过识别宿主细胞上的特异受体而使病毒吸附结合在宿主细胞上，对病毒增殖、组装或扩散的某个阶段是必需的，缺失Fiber-2则不能产生病毒粒子[6]，因此Fiber-2是疫苗研制的潜在抗原蛋白之一。

大肠杆菌由于其生长迅速，容易达到高细胞密度和低成本培养基的优势[7]，无论在实验室还是在工业规模上，成为许多重组蛋白(包括Fiber-2蛋白)的首选表达系统。然而，由于缺乏先进的翻译后修饰和真核伴侣蛋白，外源蛋白易聚集以包涵体形态产生[8]。生物系统中存在的各种小分子可以在体外协助蛋白质折叠，以改善蛋白质在多种情况下的错误折叠和聚集，被称为化学伴侣[9]。蛋白质折叠与伴侣蛋白介导的突变缓冲有关，一些化学物质如盐、糖、氨基酸和多聚物被用来提高外源蛋白的可溶性表达[10]。……