微小RNA-6833-3p负调控LPIN1基因表达对肺癌细胞周期和增殖的影响

张静宜,夏 蕾,张晓月,谭本旭,杨镇洲

(重庆医科大学附属第二医院肿瘤中心,重庆 400010;*通讯作者,E-mail:yangzz@cqmu.edu.cn)

肺癌是呼吸系统最常见的恶性肿瘤,其发病率在我国呈现逐年增加的趋势[1,2]。肺癌预后往往较差,严重威胁人类生命健康[3,4]。肺癌细胞的无限增殖是肺癌发生和发展的重要原因[5]。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类机体内源性的小分子非编码RNA,长约22个核苷酸,具有组织特异性[6]。miRNA广泛参与基因转录后水平的调节,在细胞增殖、分化、凋亡、衰老等生理过程中扮演重要角色[7]。近年来的研究发现,miRNA在肺癌组织中高表达或低表达,发挥着癌基因或抑癌基因的作用,对肺癌的发生和发展起到关键作用[8]。miR-6833-3p由21个核苷酸组成,可抑制结直肠癌细胞的增殖[9]。miR-6833-3p在肺癌中的作用尚不明确。本研究旨在检测miR-6833-3p在肺癌细胞中的表达,探究miR-6833-3p对肺癌细胞周期和增殖的影响及机制,为肺癌的诊断和治疗提供新的研究方向。

1 材料与方法

1.1 细胞系和主要试剂

肺癌细胞(HCC827、A549、H1650、H1299)和永生化正常肺泡上皮细胞(HPAEpiC)购于上海信然生物技术有限公司;胎牛血清购于美国Gibco公司;RPMI-1640培养基和DMEM培养基购于美国Hyclone公司;四甲基偶氮唑蓝(MTT)试剂盒购于美国Sigma公司;携带miR-6833-3p的慢病毒、阴性对照慢病毒、miR-6833-3p模拟物、miR-NC、野生型与突变型LPIN1 3′非翻译区荧光素酶报告基因质粒(LPIN1-WT和LPIN1-MUT)购于广州锐博生物技术有限公司;细胞周期试剂盒购于武汉博士德生物科技有限公司;双荧光素酶报告基因实验试剂盒购于美国Promega公司;Lipofectamine®3000购于美国Life Technologies公司;实时定量聚合酶链反应(qPCR)试剂盒购于日本TaKaRa公司;一抗CDK2、CDK4、Cyclin D1、GAPDH购于美国Abcam公司。……