小鼠Cdc14A荧光表达载体的构建及鉴定

侯 力,孟 峻

(1内蒙古医科大学附属医院临床检验诊断学教研室,呼和浩特 010059;2内蒙古医科大学附属医院检验科;*通讯作者,E-mail:nmfrank@163.com)

细胞周期分为4个阶段,即G1、S、G2、M四期,此周期由细胞调控系统控制,细胞周期蛋白依赖激酶是细胞调控系统的核心成分。此外蛋白磷酸化和脱磷酸化之间的动态平衡对细胞周期调控也是至关重要的。这些与细胞周期蛋白的合成和降解一起,决定了细胞生长和分裂的顺序[1]。细胞分裂周期蛋白14A(Cdc14A)基因位于1p21染色体上,属于双特异性蛋白酪氨酸磷酸酶家族。它是一种重要的细胞周期调节磷酸酶,在真核生物G2期阻滞中发挥重要作用[2-4]。磷酸酶的Cdc14家族是高度保守的,并且Cdc14同源基因已经在一些生物体中被鉴定,不同物种中的Cdc14蛋白在定位和功能上有差异,在人类细胞中发现的Cdc14同源序列包括CDC14A和CDC14B(hCdc14A和hCdc14B)[5]。本实验通过构建Cdc14A基因的荧光表达载体,为研究Cdc14A在小鼠一细胞期受精卵G2/M期转换作用的研究奠定基础。

1 材料和方法

1.1 材料

目的基因通过本实验室合成。Stbl3感受态细胞和真核表达载体pcDNA3.1-MYC-C购自广州辉骏生物科技有限公司;HEK293细胞购自北京全式金生物技术有限公司。限制性内切酶KpnⅠ、XhoⅠ购自ThermoScientific;DMEM培养基购自GIBOC公司;微量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒购自上海生工B518131-0100;质粒小量抽提试剂盒购自上海生工B518191-0050;PrimeSTAR Max Premix(2X)购自Takara R045A;TaKaRa Taq购自Takara R001B;ClonExpress Mulit One StepCloning Kit连接酶购自诺唯赞C113-2;DNA测序由生工生物工程上海股份有限公司完成。洁净工作台(AIRTECH,SW-OJ-2F);CO2培养箱CB115(德国WTB-binder);恒温空气振荡器购自上海艾测电子科技有限公司;电泳仪(君意,JY600E)。……