白头翁汤通过抑制TLR4-ERK1/2信号通路缓解LPS诱导的微血管内皮细胞炎性反应

贺尚文，王月明，张 慧，侯思鲁，刘晓晔，董 虹*

(1.北京农学院 兽医学(中医药)北京市重点实验室，北京 102206；2. 北京大学，北京 100871)

白头翁汤是《伤寒论》清热解毒类方剂中的代表方剂，具有凉血止痢之效[1]。目前研究表明，白头翁汤具有较好的抗菌抗炎作用[2-3]，可通过降低IL-8、ICAM-1水平调节肠道组织炎症以治疗大鼠大肠杆菌性腹泻，并与抗生素治疗相比可明显保护肠道菌群的种类及丰度，在治疗动物细菌性疾病方面具有较好的应用前景[4]。内毒素(LPS)是由革兰阴性菌产生的一种强致病性毒素，可引起机体强烈的炎症反应，导致内毒素血症[5]，常被用作刺激因子调控IL-6、IL-1β等相关炎性因子的表达，构建炎症模型[6-7]。LPS-TLR4的信号通路转导途径是目前常见的LPS刺激途径，LPS主要通过Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)识别宿主细胞并激活天然免疫系统[8]。LPS与TLR4结合后TLR4产生构象变化激活下游信号通路，使得下游的肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6, TRAF6)活化，引起 ERK、JNK 和 p38 的 MAPK 信号转导而导致炎性因子的释放，引发病理变化[9]。实验室前期研究表明，白头翁汤具有良好的抗毒素药理作用，可通过抑制炎症反应，降低LPS诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(rat microvascular endothelial cells, RIMVECs)损伤，保护微血管内皮细胞，从而激活跨内皮中性粒细胞(PMNs)溶菌酶，增强PMNs杀菌能力，发挥抗菌作用[10-13]。但其中具体作用机制尚不明确，因此本研究以RIMVECs细胞为模式细胞，利用RT-PCR、Western blot等方法检测白头翁汤对LPS诱导的RIMVECs 的TLR4、TRAF6、P-ERK基因及蛋白表达的影响；以ERK1/2信号通路特异性阻断剂PD98059作用后探究对下游炎性因子的影响，从而研究白头翁汤的抗炎机制，为抗炎中药的开发奠定试验基础，为抗炎策略提供参考。……