建立检测禽流感病毒抗体的液相蛋白芯片方法

刘向楠 丛锋 关剑池 刘贤旭

1.广东科贸职业学院动物科技学院 510430

2.广东省实验动物监测所 510000

禽流感（Avian influenza，AI）是由禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起多种禽类发生感染和死亡的一种重要动物疫病，严重危害世界养禽业发展和公共卫生安。目前，血凝抑制和酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测是实验室检测AIV 抗体的主要技术方法。但是，血凝抑制试验1%红细胞悬液的制备需要新鲜配制和保存，结果判读主观性较强。ELISA 试剂盒成本较高，无法实现多重抗体检测。而本研究采用的液相蛋白芯片技术（Flexible Multi Analyte Profiling，xMAP）作为一种新型的高通量检测技术，具有多重检测和灵敏度高的技术优势，已普遍用于实验动物疫病抗体检测，在畜牧兽医领域研究较少，尚未商品化应用。

本研究建立了检测AIV 抗体的xMAP 检测方法，丰富了AIV 检测技术方法，具有解决临床上高通量抗体检测的潜力，为禽流感的诊断、检测及防控提供了一种新的技术手段。

1 材料与方法

1.1 试剂禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）H2N2核蛋白（Nucleoprotein，NP 蛋白）购自广州千寻生物技术有限公司。马立克病毒（Marek's disease virus，MDV）阳性血清、新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）阳性血清、AIV 阳性血清、SPF 鸡血清购自哈尔滨维科生物科技有限公司。传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus，IBDV）阳性血清、传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）阳性血清、传染性喉气管炎（Infectious Laryngotracheitis virus，ILTV）阳性血清购自中国兽医药品监察所。禽白血病病毒（Avian leukosis virus，ALV）阳性血清为哈尔滨国生生物有限公司的禽白血病抗体ELISA 试剂盒中阳性对照品。28 份临床鸡血清采集自广东惠州某养鸡场。

生物素标记的兔抗鸡IgG 购自Solarbio 公司，藻红蛋白标记的链霉亲和素（SAPE）购自Invitrogen 公司。……