β3GnT8基因对肺腺癌A549细胞黏附、迁移、侵袭的影响

行书丽 董永书 (河南医学高等专科学校， 河南 郑州 450000； 河南省中医药研究院)

肺癌是临床常见的恶性肿瘤，发病率逐年上升，现已成为死亡率最高的恶性肿瘤之一。早期诊断并阻止其侵袭转移是目前研究的热点。肿瘤细胞的糖蛋白糖链结构异常是恶性转化和转移的普遍特征，故细胞表面的糖链结构对肿瘤细胞黏附、迁移、侵袭很重要。β1,3-N乙酰氨基葡萄糖基转移酶Ⅷ(β3GnT8) 是从人肺cDNA文库中克隆到的糖基转移酶家族中的一个新成员〔1〕，该基因在多种肿瘤细胞株中β3GnT8都有不同程度表达，且发现它与恶性肿瘤的浸润转移密切相关〔2,3〕。目前该基因对肺癌细胞的浸润转移报道较少，本文将β3GnT8的反义表达载体转染肺腺癌A549细胞，特异性地抑制β3GnT8基因在A549细胞中的表达，来探讨β3GnT8对A549细胞生物学行为的影响。

1 材料与方法

1.1材料 人肺腺癌A549细胞购自中国科学院上海生命科学院细胞库；DMEM、胎牛血清购自Gibco公司；Trizol购自Ambion公司；引物由北京擎科生物技术有限公司合成；逆转录试剂盒、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测试剂盒购自Vazyme公司；二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒购自碧云天公司；兔多抗GAPDH购自杭州贤至生物有限公司；CD147一抗购自Boster公司，基质金属蛋白酶(MMP)-2一抗均购自武汉三鹰生物技术有限公司产品；电化学发光(ECL)底物液购自Thermo旗下Nun公司；显影定影试剂盒购自天津市汉中摄影材料厂。

1.2方法

1.2.1A549细胞培养及传代 将在液氮中保存的A549细胞取出复苏，于37℃、 5%CO2饱和湿度条件下，用含10%胎牛血清的完全培养基培养细胞，待细胞的密度达到80%左右时，用0.25%胰酶消化细胞，待细胞相互分离变圆即消化完成，快速弃去胰酶，加入完全培养基，吹打细胞，制成单细胞悬液，按1∶4的比例传代扩大培养。……