涤痰汤对血管性痴呆大鼠海马TNF-α、NF-κB、IL-1β、IL-10表达的影响

杨超 杨佳 刘玲

(1湖北中医药大学，湖北 武汉 430061；2湖北省中西医结合医院老年病科；3华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科；4湖北中医药大学第一临床学院)

涤痰汤治疗血管性痴呆(VD)疗效确切，但其作用机制尚不明确。脑缺血引起的炎症反应在VD的发生发展过程中扮演了重要角色〔1〕。本实验通过观察涤痰汤对VD大鼠海马组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、核因子(NF)-κB、白细胞介素(IL)-1β、IL-10表达的影响探讨其治疗VD的可能机制。

1 材料与方法

1.1实验动物 SPF级健康Wistar大鼠40只，鼠龄8～10 w，雄性，体重(200±20)g，购自湖北省疾控中心，许可证编号：SCXK(鄂) 2008-0004。

1.2药物和试剂 涤痰汤由制半夏8 g，天南星8 g，橘红5 g，炒枳实6 g，茯苓6 g，人参3 g，竹茹2 g，石菖蒲3 g，甘草1.5 g，生姜5 g组成，购于湖北省中医院，分别水煎浓缩成含生药量0.971 g/ml、0.485 g/ml，无菌分装后备用。一抗兔抗大鼠TNF-α和兔抗大鼠NF-κB抗体(abcam公司，英国)、二抗山羊抗兔抗体(abcam公司，英国)；苏木素-伊红(HE)染色所需试剂由国家中医药管理局老年性痴呆(醒脑益智)重点研究室提供；IL-1β、IL-10试剂盒购于南京建成生物工程研究所。

1.3仪器 RM2235自动切片机(德国徕卡)，SA201 Morris水迷宫视频分析系统(江苏赛昂斯生物科技有限公司)，KZ-Ⅱ型匀浆仪(康涛科技有限公司)，DYY-6C型电泳仪(北京六一仪器厂)，V300型扫描仪(EPSON)，722S型可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，TGL-16C型离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.4造模 动物适应性喂养1 w后，采用改良的永久性双侧颈总动脉结扎法制备VD大鼠模型：大鼠术前6 h禁水，12 h禁食，给予10%水合氯醛(3 ml/kg)腹腔注射麻醉，剪去颈前部手术区域毛发，消毒，钝性分离左侧颈总动脉，用0号手术线结扎左侧颈总动脉的近心端和远心端，用剪刀从中间剪断，依次逐层缝合。……