新城疫强毒特异性反转录荧光定量PCR检测方法的建立与应用

徐敏丽，于江，逯璐，张玉玉，任素芳，陈智，孙文博，郭立辉，吴家强，张琳

（1.山东省农业科学院畜牧兽医研究所／山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东 济南 250100；2.山东管理学院新兴业态发展研究所，山东 济南 250357）

新城疫（newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的一种急性、高度接触性的禽类传染病，是世界动物卫生组织（OIE）规定的法定报告疫病，给许多国家养禽业造成巨大经济损失［1］。NDV又称禽副黏病毒1型，在分类上属于单链负股病毒目副黏病毒科副黏病毒亚科的禽腮腺炎病毒属，其基因组包含6个开放阅读框，从5′到3′依次编码L－HN－FM－P－NP共6种结构蛋白［2，3］，其中F蛋白是最主要的糖蛋白之一。病毒毒力的强弱与其裂解位点区的氨基酸序列相关，强毒株氨基酸序列一般为112R／K－R－Q－K／R－R－F117，弱毒株则为112G／E－K／R－Q－G／E－R－L117，氨基酸序列上的差异也成为在基因水平上区分NDV强、弱毒株的靶点。

目前，我国对于新城疫的防控主要依靠疫苗，有效的疫苗和合理的免疫程序很大程度上控制了该病的暴发和流行。但由于我国养殖环境复杂，标准化、规模化养殖水平不一，致使NDV在养殖环境中长期存在［4］，这也给病毒的变异进化提供了条件，不但在宿主范围和致病性上产生了变化，而且常以非典型病症呈现［5－7］，所以NDV的鉴定和病例的确诊必须经过实验室诊断。当前，NDV检测主要使用PCR技术和血清学技术。相比于血清学技术，PCR技术在病毒的快速检测中具有先天性优势，不仅耗时短、操作简便，而且敏感性更高。然而，由于疫苗（灭活疫苗和弱毒苗）的广泛使用和一些天然弱毒株的存在［8］，从免疫禽类中检测到的NDV可能是被接种的疫苗病毒或是不至于引起发病的弱毒株，即使检测和分离到了NDV，也不能确定禽类感染了野毒。……