TNF-α对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞自噬和增殖的影响及作用机制研究

汪吉烽 王维维 吴颖慧 罗晨栩 窦瑞玲 高玲 王国芬 莫选荣 罗心静

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种慢性炎症性自身免疫疾病，其主要的病理特征是由于关节滑膜组织增生和炎症而导致的软骨及骨的损伤。RA患者关节组织中的滑膜成纤维细胞（rheumatoid arthritis synovial fibroblasts，RASF）是滑膜炎症的主要效应细胞，其过度增殖造成的细胞数量异常增多是滑膜增生和骨质破坏的重要机制[1]。近年的研究表明，TNF-α、IL-1等炎症因子诱导的RASF自噬上调是其凋亡抵抗和异常增殖的重要原因之一，并与RA滑膜增生密切相关[2]。因此调控RASF自噬所导致的滑膜增生已成为治疗RA的有效策略[3]。NF-κB是在RA发病中起重要作用的炎症信号通路之一，其在RA滑膜组织中高度活化，参与炎症因子诱导的滑膜炎症反应[4]。但其对炎症因子诱导的RASF自噬的影响尚不太清楚。本研究拟以人类RASF细胞株MH7A作为载体，观察TNF-α对RASF自噬和增殖的影响，并进一步通过抑制NF-κB通路来探讨这一影响的作用机制。

1 材料和方法

1.1 主要材料和试剂 MH7A购自广州吉妮欧公司；改良杜氏伊格尔培养基（DMEM）、FBS均购自美国Gibco公司；Bay11-7082购自美国MedChemExpress公司；总RNA分离试剂盒（Trizol）购自美国Applied Biosystems公司；甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）多克隆抗体购自美国GOOD HERE公司，辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG购自美国Santa Cruz公司；重组人TNF-α购自美国Novoprotein公司；噻唑蓝法（MTT）试剂盒、荧光二抗、4，6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）凝胶配制试剂盒均购自南通碧云天公司；唯Bcl-2同源-3域蛋白-1（Beclin-1）兔单克隆抗体、磷酸化 NF-κB-p65（P-p65）兔单抗均购自美国Cell Signaling Technology公司；……