芹菜素调控PTCH1/GLI1/Bcl-2轴对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响

潘岩 刘鲁明 花永强

胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，因其隐匿起病、高度恶性，且缺乏明显的临床表现，85%的患者在发病确诊时已属于癌症终末期，5年生存率低于7%[1]。Sonic Hedgehog信号通路在胰腺肿瘤的形成发展、浸润转移、肿瘤多药耐药等过程中发挥重大作用[2]，靶向调控GLI1转录因子可改善患者临床预后[3]。芹菜素作为一种天然黄酮物质，普遍存在于食用蔬菜和水果中，研究证明其可通过调控肿瘤相关基因、诱导细胞凋亡、调节信号通路传导、阻断肿瘤血管形成、放化疗增敏及化学预防等多种途径发挥抗肿瘤作用[4-5]。有研究报道芹菜素对胰腺癌有明显的抑制作用[5-7]，但其作用机制尚不明确。本研究以PTCH1/GLI1/Bcl-2轴为切入点，探索芹菜素对胰腺癌细胞增殖和细胞凋亡的影响及其潜在作用机制。

1 材料和方法

1.1 细胞株 人胰腺癌BxPC-3细胞、SW1990细胞均为复旦大学附属肿瘤医院中西医结合科刘鲁明教授惠赠。

1.2 主要试剂与仪器 RPMI1640购自美国Hyclon公司；FBS试剂购自美国Gibco公司；青、链霉素双抗购自德国Sigma公司；体外增殖检测试剂盒（CCK-8）购自日本本同仁化学研究所；细胞凋亡检测AnnexinV/PI试剂盒购自美国Invitrogen公司；逆转录试剂盒、PCR试剂盒均购自加拿大Fermentas公司；PTCH1、GLI1、Bcl-2和GAPDH引物均由上海生物工程技术有限公司合成；兔抗人PTCH1、GLI1、actin均购自美国 Cell Signalling Technology公司；山羊抗兔二抗购自美国Santa Cruz公司；BD FACalibur System流式细胞分析仪均购自美国BD公司；基因扩增仪购自德国Eppendorf公司。

1.3 方法

1.3.1 细胞培养 将人胰腺癌BxPC-3细胞、SW1990细胞接种于含10%FBS、1%青、链霉素的RPMI 1640培养基中[8]，在37℃、5%CO2饱和湿度条件下培养，当细胞融合达75%左右时，1∶3传代。……