LncRNA SNHG20通过miR-520f-3p调控胆管癌细胞增殖和侵袭

关沧海 刘浪 史武江 王健岗 钟翔宇 姜兴明

胆管癌是胆道系统中常见的恶性肿瘤，根据发生部位的不同主要分为肝内胆管癌和肝外胆管癌两类，据统计胆管癌患者的5年生存率不足30%，其原因包括患者早期症状不明显、肿瘤解剖位置不易获得以及缺乏特异性分子标志物等［1-2］。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一类大于200个核苷酸的几乎不能编码蛋白的转录本，微小RNA（microRNA，miRNA）是一种长度为 20～24个核苷酸的小单链非编码RNA。目前许多lncRNA和miRNA已被证明在肿瘤的发生发展中发挥重要作用［2-5］。其中lncRNA小核仁RNA宿主基因20（small nucleolar RNA host gene 20，SNHG20）最早在肝细胞癌研究中被发现［6］。而miR-520f-3p是一种肿瘤相关miRNA，目前已被证实在胶质瘤和肝癌中发挥抑癌作用［7-8］，但是在胆管癌中 SNHG20 和 miR-520f-3p的关系及其临床价值和生物学作用尚未阐明。本研究探讨lncRNA SNHG20和miR-520f-3p对胆管癌细胞增殖和侵袭能力的调控及机制，以期为胆管癌诊断和治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 主要材料与仪器

收集哈尔滨医科大学附属第二医院2012年3月至2014年3月收治的20例胆管癌患者肿瘤组织及相应癌旁正常组织，所有组织均经病理学诊断。所有患者术前均未接受放化疗。本研究经哈尔滨医科大学附属第二医院伦理审查委员会批准，研究对象知情同意。

人正常胆管上皮细胞系HIBEC和胆管癌细胞系CCLP-1、QBC939、RBE、TFK-1购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心；胎牛血清、DMEM培养基、TRIzol试剂盒和LipofectamineTM3000均购自美国 Invitrogen 公司；si-NC、si-SNHG20、miR-NC、miR-520f-3p mimics、inh-NC和 miR-520f-3p inhibitor由上海吉玛制药技术有限公司合成；cDNA逆转录试剂盒和SYBR Green Master mix试剂盒购自瑞士Roche公司；……