鸭源鸡杆菌pfs基因的扩增及原核表达

姬向波，皇甫和平，张晓曼，唐桂芬，向瑞平

(1.河南省非常规饲料资源创新利用重点实验室，河南 郑州 450046；2.河南牧业经济学院 动物医药学院，河南 郑州 450046)

鸭源鸡杆菌(Gallibacteriumanatis，G.anatis)是巴氏杆菌科鸡杆菌属的代表种，是家禽上呼吸道的一种常在菌。该菌的感染可致蛋鸡发生腹膜炎和输卵管炎，并常和大肠杆菌等条件性致病菌引发混合感染，引起蛋鸡产蛋量下降、死亡率升高。该菌具有多重耐药性，临床用药效果不佳，严重影响蛋鸡养殖的经济效益[1，2]。

5′-甲硫腺苷/S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(5′-Methylthioadenosine/S-adenosylhomocysteinen ucleosidase，PFS)是细菌的甲硫氨酸循环过程中调节平衡的关键酶，其参与的甲硫氨酸循环可产生密度感应信号分子AI-2[3，4]。体外原核表达的禽致病性大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌的PFS蛋白和LuxS蛋白，具有共同催化S-腺苷高半胱氨酸(S-adenosyl homocysteine，SAH)产生信号分子AI-2的生物活性[5，6]。金黄色葡萄球菌的pfs基因可能通过降低自溶分泌的胞外DNA水平从而降低生物膜的形成能力和体内增殖能力，导致胞外蛋白酶水平下调、菌株毒力下降[7]，因此pfs可作为治疗金黄色葡萄球菌药物的靶点，为研发治疗多重耐药菌的药物提供新思路。

皇甫和平等[8]从河南地区发生输卵管炎和腹膜炎为主要特征的母鸡体内分离到多株鸭源鸡杆菌，经鉴定均具有多重耐药性，但目前尚不清楚这些菌株是否携带和表达pfs基因。本试验以具有多重耐药性的临床分离株G7的基因组为模板，扩增了pfs基因，并与其他参考菌株相应的基因序列和氨基酸序列进行同源性分析，构建了该基因的原核表达载体，初步摸索了诱导表达条件，为G7菌株相应基因功能的后续研究奠定了基础。……