慢病毒介导短发夹RNA干扰技术建立小鼠肺组织TRIF沉默模型▲

谢 军 龙晓茹 任 洛 刘恩梅 谢晓虹

(1 重庆医科大学附属儿童医院两江呼吸科，2 儿童发育疾病研究教育部重点实验室、国家儿童健康与疾病临床医学研究中心、儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地、儿科学重庆市重点实验室，重庆市 400014，电子邮箱：cyxiejun@126.com；3 重庆医科大学附属儿童医院两江感染科，重庆市 400014)

β干扰素Toll/白细胞介素1受体结构域衔接蛋白(Toll/interleukin 1 receptor domain containing adaptor inducing interferon-β，TRIF)是含TIR结构域接头蛋白家族中最长的分子，含712个氨基酸，也是Toll受体(Toll-like receptor，TLR)家族中TLR3、TLR4信号通路关键的衔接分子，参与天然免疫和适应性免疫，在抗病毒感染中有重要作用[1]。研究表明，呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染可活化TRIF，介导γ-干扰素高表达,从而参与气道炎症和气道高反应，而非特异性抑制TRIF可减轻RSV引起的气道炎症和高反应性[2-3]。为了更好地探讨TRIF信号通路在病毒感染，尤其是在RSV感染中的作用，建立一个局部TRIF低表达动物模型十分必要，而目前尚没有肺组织局部沉默TRIF的小鼠模型。本研究旨在采用一种简便且无创的慢病毒介导短发夹RNA(short hairpin RNA，shRNA)干扰技术建立BALB/c小鼠局部肺组织TRIF低表达模型，探讨TRIF在RSV感染中的作用及其潜在的价值。

1 材料与方法

1.1 TRIF慢病毒载体的构建 本实验中所用的shRNA慢病毒载体由上海吉凯基因有限公司提供。事先已设计并合成4条针对TRIF的shRNA干扰质粒，并采用小鼠巨噬细胞系RAW246.7筛选出沉默效果最优的干扰序列，然后进行载体的构建和慢病毒包装。TRIF-shRNA序列5′-GGACCACTCAGAAACATCT-3′，对照CON-shRNA序列5′-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3′。质粒载体信息：GV115载体，原件顺序hU6-MCS-CMV-EGFP。

1.2 实验动物及模型的建立 无……