IL-23和IL-35在良恶性胸腔积液鉴别诊断中的意义

陈钰 陈斌斌 郭萌

【摘 要】目的：通过观察IL-23及IL-35在正常人群及良、恶性胸腔积液患者中的表达水平，以探讨这两项指标在不同种类胸腔积液鉴别诊断中的意义。方法：选取2020年8月至2021年4月于我院就诊的胸腔积液患者共60例，将其分为良性胸腔积液组和恶性胸腔积液组，用酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测病例组及正常对照组体内的IL-23和IL-35的含量，通过组间及组内数据进行对比和相关性分析。结果：在血清中，与正常对照组相比，良、恶性胸腔积液组的IL-23含量均显著升高（P<0.05），其中良性胸腔积液组升高的更为明显（P<0.05）；而IL-35在良性组则表现为含量下降，在恶性组表达上调（P<0.05）；在胸腔积液中，两种白介素的表达与血清中的水平一致，即IL-23含量在良性组升高的更为明显，而IL-35在良性胸腔积液中含量下降，在恶性组含量升高；良恶性胸腔积液患者外周血和胸腔积液中IL-23水平呈正相关（r=0.867，P<0.01），IL-35水平亦呈正相关（r=0.784，P<0.01）。结论：检测患者体内IL-23及IL-35的含量对不同种类胸腔积液的鉴别诊断具有一定价值。不同种类胸腔积液中IL-23及IL-35的含量也有所不同，且其在良恶性胸腔积液中鉴别中具有一定意义。

【关键词】IL-23；IL-35；胸腔积液

在我國良恶性胸腔积液的代表即结核性胸膜炎与癌性（主要是肺癌）胸腔积液。近几年来，鉴别胸腔积液的生物学标志物很多，但是文献的相关报道不一，范围波动大而且受地区的结合感染率影响较大[1]。因此，寻找直接或间接反映癌肿或结核菌引起炎症反应存在的指标，以及探讨联合检测的价值就成为近年研究热点。

1 研究对象

选择2018年8月至2019年4月于解放军八一医院就医并确诊的的良性胸腔积液30例，其中包括肺炎性胸腔积液14例，结核性胸腔积液16例；恶性肿瘤胸腔积液30例，均经组织病理学证实。另选取于本院正常体检病例30例，设立正常对照组。

2 研究方法

2.1 标本采集与预处理

各组受试者于清晨采取静脉血5ml，3000rpm离心10min，取上清存于-20℃冰箱备用。良、恶性胸腔积液组分别于治疗前采集胸腔积液5ml，3000rpm离心10min，取上清存于-20℃冰箱备用。

2.2 酶联免疫吸附试验（ELISA）测定IL-23、IL-35含量

标准品的稀释与加样：标准孔10个，加入相应浓度标准品。加样：设空白孔一个及待测样品孔若干，待测孔先加样品稀释液40uL，再加待测样品10uL。温育：封板膜封板，37℃水浴箱温育30分钟。洗涤：蒸馏水30倍稀释浓缩洗涤液，撕去封板膜，甩干，洗涤液洗板5次，每次间隔30秒，拍干。加酶标：每孔酶标液50uL，空白孔除外。温育：封膜温育30分钟。洗涤：稀释洗涤液洗5次，拍干。显色：每孔显色A液50uL，B液50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。终止：每孔终止液50uL。测定：空白孔调零，450nm波长测量每孔吸光度（OD值）。

2.3 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析。计数资料采用（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（χ±s）表示，进行t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

3 研究结果

3.1 血清中IL-23和IL-35的含量测定

实验数据显示，与正常对照组相比，良、恶性胸腔积液组的IL-23含量均显著升高（P<0.05），其中良性胸腔积液组升高的更为明显（P<0.05）；而IL-35在良性组则表现为含量下降，在恶性组表达上调（P<0.05），见表1。

3.2 胸腔积液中IL-23和IL-35含量对比

通过实验发现，胸腔积液中两种白介素的表达与血清中的水平一致，即IL-23含量在良性组升高的更为明显（P<0.05），而IL-35在良性胸腔积液中含量下降，在恶性组含量升高（P<0.05），见表2。

3.3 良恶性胸腔积液患者外周血和胸水中IL-23/IL-35相关性分析

恶性胸腔积液患者外周血和胸水中IL-23水平呈正相关（r=0.867，P<0.01），IL-35水平亦呈正相关（r=0.784，P<0.01）。

4 讨论

良性胸腔积液主要以结核性胸腔积液为主，通常属于慢性疾病，其病因一般是胸膜下组织的破裂导致结核杆菌进入胸腔，从而诱发迟发型变态反应。恶性胸腔积液主要是由于肿瘤细胞侵犯了胸膜淋巴微孔和（或）纵隔淋巴结从而使局部淋巴回流受阻，导致正常胸腔内液体的重吸收受阻，进而导致胸腔积液的发生。虽然目前对于两者的发病机制、鉴别诊断的研究越来越深入，但是由于两者的临床表现和实验室检验结果不易区分，以及缺少病因学、病理学的依据，所以良恶性胸腔积液的鉴别仍是一大难题[2]。

本研究结果显示，与正常对照组相比，IL-23含量在良恶性胸腔积液患者的血清及胸水中均明显升高（P<0.05），但在良性胸腔积液中升高更为显著（P<0.05）。血清组也呈现正相关性，表明可以通过测量IL-23和IL-35在血清中的含量，为判断受试者是否患有良恶性胸腔积液提供一定依据。

在本实验中，收集的良性胸腔积液可能CD4+T细胞含量升高，从而导致IL-23分泌增多。因此我们猜测良性胸腔积液产生过程中的机制可能为：机体在炎症刺激下激活CD4+T，使其在体内表达水平升高，活化之后的抗原提呈因子分泌IL-23增多，IL-23與受体结合后一方面促进Th17细胞增殖分泌IL-17、IL-22等促炎因子，另一方面IL-23通过自分泌的方式作用于树突状细胞和吞噬细胞进一步分泌IL-1、IL-6等促炎因子，放大局部炎症效应[3]。这与本实验中良性胸腔积液中IL-23含量升高的结果相符。

由于良性胸腔积液中促炎因子和趋化因子表达更为显著，因此本实验结果显示IL-23在良性胸腔积液中的含量上高更为明显。

在本研究中，IL-35含量在良性胸腔积液中降低，而在恶性胸腔积液中升高。在良性胸腔积液的免疫损伤和炎症反应中，Th17细胞和IL-17发挥着重要作用。由于IL-35具有抑制Th17细胞的发育、增殖，抑制干扰素γ、IL-17分泌的功能，所以在良性胸腔积液的形成中发挥炎性抑制作用，因此IL-35在良性胸腔积液中的表达程度降低，这与本实验结果相符。在恶性胸腔积液中，CD4+CD25+Treg的含量显著高于良性胸腔积液，其可以抑制自身细胞免疫，并且Treg细胞非常容易被趋化到积液中，并在其中大量堆积，最终导致胸腔积液的形成。Treg为CD4+T细胞中的一个亚群，抑制抗肿瘤免疫的产生[4]。由此可以得出在恶性胸腔积液中，Treg细胞含量较高，一定程度上可以促进肿瘤的发展。本实验中IL-35在恶性胸腔积液中含量明显增高，表明Treg细胞和IL-35的分泌互相影响，并且二者共同作用从而促进肿瘤的生长与浸润。

在临床上，良恶性胸腔积液由于临床和实验室检查结果类似，鉴别困难，因此寻找可以有效鉴别此类疾病的相关指标显得尤为重要。在我们的研究中发现，IL-23在不同种类胸腔积液患者体内都有所升高，但在良性胸腔积液中升高的程度更为显著，而IL-35在二类疾病中的表现则恰为相反，而与血清结果呈一致。综上所述，我们推测可以通过大批量检测二指标在胸腔积液中的表达程度，建立合适的参考区间，检测受试者血清中二指标可以为良恶性胸腔积液的鉴别诊断提供一定依据。

本次实验依旧存在一些不足。首先，实验采集的标本量较少，并不能很好地佐证实验结论，今后需要扩大样本量从而进一步验证IL-23和IL-35在良恶性胸腔积液鉴别诊断中的价值，以便于更好地服务临床。其次，实验分组不够细致，仅仅研究了良、恶性胸腔积液标本里面IL-23和IL-35的含量，然而采集的良性胸腔积液中还分为结核性和肺炎性胸腔积液。今后可以将分组更加细致化，将肺炎性和结核性胸腔积液单独作研究，以探讨IL-23和IL-35两种指标在其鉴别诊断中是否也存在一定的意义。最后，本实验的采用的是ELISA的研究方法。今后可以采用分子实验的方法再次进行测量，以提高实验的准确度和特异度。

参考文献

[1] Oppmann B，Lesley R，Blom B，et al.Novel p19 protein engages IL-12p40 t o form a cytokine，IL-23，with biological activities similar as well as distinct from IL-12.Immunity，2000，13（5）：715.

[2] 杜国盛，石炳毅.白介素23的生物活性与免疫调节[J].解放军医学杂志，2009，34（3）：360-362.

[3] Wang Z，Liu JQ，Liu Z，et a1.Tumor·derived IL-35 promotes tumor growth by enhancing myeloid c e l l a c c u m u l a t i o n a n d a n S i o - g e n e s i s . J Immunol，2013，190（5）：2415-2423.

[4] 李翔云，李薇，张泽明.结核性、恶性胸腔积液的鉴别诊断的研究进展[J].临床诊疗进展，2018，10（11）：109-112.