Mir-335-5p靶向G6PD对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响*

樊小群， 李 欢， 朱华雄， 黄健平， 何吕芬

(海南省三亚市人民医院检验科， 三亚 572000)

结肠癌是最常见的恶性肿瘤。在全球范围内已90%以上的结肠癌患者死亡[1]，尽管改良的筛查技术和先进的治疗方法有助于提高患者的生存率，但是仍没有一种完善方案的治疗结肠癌[2]。因此亟需探索新型控制结肠癌的治疗策略。近年来越来越多研究发现，抑制肿瘤的代谢途径可有效抑制肿瘤发生，而6-磷酸葡萄糖脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD)是糖代谢过程重要的酶之一，在肿瘤的生存中发挥重要作用[3]。微小RNA(microRNAs，miRNAs)是一类小的非编码RNA，通过靶向mRNA降解或翻译抑制来控制基因表达[4]，mir-335-5p作为结肠癌抑制因子的作用已被证实[5]。然而，mir-335-5p在结肠癌细胞中抑制生长增殖、凋亡的机制是否与G6PD相关尚未清楚。本研究通过体外培养结肠癌细胞SW480，探究mir-335-5p过表达对结肠癌细胞SW480增殖、凋亡的影响并初步探讨其机制。

1 材料与方法

1.1 细胞与试剂

人结肠癌细胞SW480和结肠上皮细胞(intestinal epithelial cells，IEC)均购自于中国科学院细胞库，miR-335-5p mimic质粒、miR-335-5p NC质粒购自于上海吉凯基因有限公司设计并合成购自于上海吉凯基因(miR-335-5p模拟物序列为5'-UACAGUACUGUGAUAACUG AA-3'，模拟阴性对照(NC)序列为5 '-GTTCTCCGAAAACGTGTCACGT-3')，Lipofectamine 3000(货号L3000001)、PCR试剂盒(货号 14966005)均购自于美国ThermoFisher公司，反转录试剂盒(货号K1622)购自于美国Fermentas公司，Trizol(货号46301)购自于美国Sigma公司，荧光素酶活性检测试剂盒(货号E2920)购自于美国promega公司，荧光素酶报告载体由上汉恒生物公司提供，抗体G6PD(货号ab993)、抗体Bcl-2(货号ab185002)、抗体Bax(货号ab32503)均购自于美国abcom公司，MTT试剂盒(货号M1025 )购于北京索莱宝科技有限公司。

1.2 仪器

酶标仪(型号TECAN spark)购自于帝肯(上海)贸易有限公司，电泳仪(型号1658001)购自于美国Bio-Rad公司。……