过表达miR-449a对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜的保护作用及机制研究

卢 静，李建红，彭 巍

(1.成都市第五人民医院神经内科，四川 成都 611130；2.成都市第五人民医院普外科，四川 成都 611130)

1 材料与方法

1.1 材料

研究对象：SD健康雄性大鼠(由江苏大学动物实验中心提供)40只，体质量210～230 g，平均(219.00±19.95)g，放在温度18～26 ℃、湿度45%～55%的干净笼子中喂养，饮水和新鲜干燥的饲料均进行消毒之后供其自由食用1周。

主要试剂：兔抗小鼠免疫球蛋白A(immunoglobulin A，IgA)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M，IgM)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G，IgG)抗体(BD公司)；兔抗大鼠白细胞介素-8(interleukin-8，IL-8)、白细胞介素-17(interleukin-17，IL-17)、白细胞介素-10(interleukin-10，IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)抗体(Dako公司)；大鼠鼠抗兔紧密连接蛋白Claudin-1、Toll样受体4(toll-like receptor 4，TLR4)抗体(Hyclone公司)。

1.2 方法

1.2.1 建模及分组 随机选取10只大鼠作为对照组，不做任何处理。其余30只大鼠进行溃疡性结肠炎建模，造模前所有大鼠禁食不禁水36 h，称重后使用10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔内注射麻醉，灌胃针用润滑油涂抹后，从大鼠肛门口插入约8 cm左右，将1 mL混合液一次性注入，再注入0.5 mL空气，捏紧肛门，将大鼠臀部倾斜朝上约15 min，使其自然苏醒，注意保暖。大鼠出现浓血便、体型消瘦、少食懒动、眯眼、反应迟钝等生理表现时表明建模成功。最终25只大鼠建模成功，将其随机分为模型组9只，抑制miR-449a组8只，过表达miR-449a组8只。将所有大鼠放置于玻璃麻醉箱内麻醉，将含4%七氟醚棉球的小烧杯(50 mL)放入麻醉箱内，待动物出现呼吸变慢、四肢紧张度明显降低、角膜反射迟钝、皮肤痛觉消失等表现，则表明大鼠进入到麻醉期。麻醉之后抑制miR-449a组大鼠尾部静脉注射30 mg/kg antagomiR-449a进行干预，过表达miR-449a组大鼠尾部静脉注射30 mg/kg agomiR-449a进行干预，对照组及模型组大鼠尾部静脉注射等量生理盐水。……