基于SodC单克隆抗体的胞内劳森菌IPMA抗原检测方法的建立及应用

李敏雪，李剑男，周红，肖宁，蔺辉星，马喆，范红结，2

基于SodC单克隆抗体的胞内劳森菌IPMA抗原检测方法的建立及应用

李敏雪1，李剑男1，周红1，肖宁1，蔺辉星1，马喆1，范红结1，2*

1南京农业大学动物医学院，南京 210095；2江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州大学，江苏扬州 225009

【目的】胞内劳森菌（，LI）是引起猪增生性肠炎（porcine proliferative enteritis， PPE）的肠道病原菌，主要表现为动物福利下降，给世界养猪业造成严重的经济损失。研究通过制备鼠抗LISodC的单克隆抗体，建立一种针对LI的免疫过氧化物酶细胞单层试验（IPMA）抗原检测方法，检验其在临床上的应用性，从而为LI的病原诊断提供一种科学有效的手段。【方法】选取胞内劳森菌弱毒疫苗为研究对象，通过PCR扩增其片段，将其克隆至原核表达载体pGex-6p-1上，成功构建出pGex-6p-1-重组质粒，诱导表达重组蛋白SodC。Western Blot分析重组蛋白的反应原性，一抗使用鼠抗GST标签的抗体。以该重组蛋白为免疫原，免疫4—6周龄BALB/c小鼠，利用常规细胞融合技术、有限稀释法和间接ELISA技术筛选阳性杂交瘤细胞，并制备腹水。通过间接免疫荧光（IFA）鉴定该单抗的特异性。以该单抗为一抗，摸索并建立了LI IPMA抗原检测方法，并评价该方法的特异性、敏感性和重复性。用优化后的IPMA方法对来自江苏周边地区猪场回肠组织样品进行检测，评价该方法的临床价值。【结果】纯化后SodC蛋白浓度较高，与鼠抗GST标签的抗体发生特异性结合，表明该蛋白反应原性较好。经3次亚克隆后最终共筛选获得2株阳性杂交瘤细胞，分别命名为1D6和1F7。……