紫外分光光度法快速检测百草枯中毒

陈姿如，杜书明

百草枯(paraquat, PQ)，是一种快速灭生性除草剂，可经由皮肤、黏膜、呼吸道、消化道等进入人体，以肺部分布最多，损伤最大，肺纤维化伴呼吸衰竭是患者中毒后期死亡的主要原因，且因其在临床上没有特效解毒的手段，病死率高达80%以上[1，2]。我国2016年7月禁止生产和使用百草枯，但临床上百草枯中毒案例依旧存在。中毒患者体内百草枯浓度与病死率有着密切的关系，测定患者血浆中百草枯浓度不仅有助于准确诊断，并对制定合理的治疗方案有重要意义。本实验旨在探讨使用合适的样品前处理方法，建立灵敏、快速检测百草枯中毒的紫外分光光度法，为基层医院快速诊断百草枯中毒提供帮助。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 采用UV-2600紫外/可见分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)；7820气相色谱仪(山东鲁南瑞红化工仪器有限公司)，氮磷检测器(NPD)，DB-5毛细色谱柱(30 m×0.23 mm×0.25 μm)，LC-LX-H165A高速离心机。试剂：保险粉(连二亚硫酸钠)，碳酸氢钠，饱和氢氧化钠溶液(现配)，20%高氯酸甲醇溶液，20%硼氢化钠溶液，环己烷化学试剂均为分析纯，百草枯对照品购自上海甄准生物科技有限公司。

1.2 试验方法 抽取患者静脉血3 ml(同时做健康人对照)，3000 r/min高速离心后，取0.5 ml血浆于带盖的5 ml塑料试管中，加新鲜配制的20%高氯酸甲醇溶液0.2 ml 充分振荡30 s混匀，以 12 000 r/min高速离心10 min。取上清液0.5 ml，加入碳酸氢钠0.2 mg碱化和连二亚硫酸钠0.5 mg显色，再加饱和氢氧化钠溶液0.1 ml增色，pH>14，采用50 μl微量比色池，设置200～700 nm波长自动扫描，以蒸馏水做基线测量，扫描待测液，百草枯吸收峰出现在紫外区(395±2)nm和可见光区(605±2)nm，空白液扫描不显色，无吸收峰，记录最大吸收峰(605±2)nm吸光度，查标准曲线或回归方程求出血浆中百草枯含量。另……