猪圆环病毒3型和4型双重PCR检测方法的建立

侯承尧， 徐 通,崔建涛,田润博,郑兰兰，赵 丽，陈红英* (.河南农业大学 动物医学院，河南 郑州 45000；.河南牧业经济学院 动物医药学院，河南 郑州 450046)

猪圆环病毒(porcine circovirus，PCV) 属于圆环病毒科圆环病毒属，是一种无囊膜、二十面体对称的单股环状DNA病毒，是迄今为止发现的最小的动物病毒之一[1]。根据最新报道PCV可以分为PCV1、PCV2、PCV3和PCV4[2-3]。PCV1对猪没有致病性[4]，而PCV2被认为是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原[5]，不仅可引起PMWS，还与猪皮炎和肾病综合征(PDNS)、猪呼吸系统混合疾病(PRDC)、母猪繁殖障碍、增生性坏死性肠炎等疾病密切相关[6]。2015年,美国学者PALINSKI等[7]和PHAN等[8]发现PCV3，随后在中国、韩国和意大利等国家相继报道[9-11]。目前PCV3已经在世界范围内流行，据相关报道PCV3极可能会导致PNDS、PRDC和繁殖障碍等一系列PCV相关疾病(PCVAD)[12]。2019年,ZHANG等[3]在湖南省发现新型PCV，并暂定为PCV4型。PCV4全长为1 770 bp，和其他PCV的同源性为43.2%～51.5%，也包含2个主要的开放阅读框Rep和Cap，且发现PCV4可能与PDNS和PRDC等严重临床疾病相关。

前期研究结果显示，PCV3/4均与PDNS、PRDC相关，且两者的混合感染在我国猪场已经存在，临床诊断难于区分这2种病原体，因此需要建立实验室诊断方法。徐朋丽等[13]、田润博等[14]已经建立了针对PCV3/4单项PCR检测方法，迄今尚无同时检测和区分PCV3/4的PCR检测方法，且单项的PCR检测方法费时费力。因此，本研究旨在建立一种同时检测PCV3/4的双重PCR方法，并对河南、山西省部分地区临床病料进行检测，为这2种病原的临床诊断及流行病学调查提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 病毒株及临床样品根据徐朋丽等[13]、田润博等[14]建立的PCR方法，对实验室保存的疑似PCV感染病料样品分别进行PCV3/4检测、测序，将鉴定为阳性的病料样品用于本试验阳性对照和重组质粒的构建。……