抗登革病毒人源化单克隆抗体h1A1D的构建及纯化

刘宇梦，汪 伟，孙世宇，于 宁，李成辉，庄忻雨，孙文超，鲁会军*，金宁一* (1.广西大学 动物科学技术学院，广西 南宁530001；.军事科学院 军事医学研究院 军事兽医研究所，吉林 长春1301；3.延边大学 农学院，吉林 延吉 133000；4.温州大学 病毒学研究所，浙江 温州 35035)

登革病毒(dengue virus，DENV)是一种重要的蚊媒传染病病毒，属于黄病毒科黄病毒属，主要的传播媒介是埃及伊蚊和白纹伊蚊[1]，DENV感染可引起不同程度的临床症状，从无感染症状到有严重的登革出血热和登革休克综合征，并可能导致死亡[2-3],死亡率高达10%[4]。登革热已成为一个全球性的严重公共卫生问题[5-6]。

DENV有4种血清型(DENV1～DENV4)，每种血清型中又有多个基因型[7]，主要以DENV2型流行[8- 9]。DENV为单股正链RNA病毒，含有1个开放阅读框，编码3种结构蛋白(C、pr M和E)和7种非结构蛋白[10]。有研究表明，DENV自然感染过程中诱导的抗体明显以包膜(E)和膜前(pr M)蛋白为靶点[11-12]。研究发现，DENV单克隆抗体h1A1D 能识别ED Ⅲ上的表位，且对4种血清型具有中和活性[13-15]。鼠源性抗体作为异源蛋白应用于人体会引起针对异源蛋白的免疫排斥反应，诱发产生人抗鼠抗体，缩短了抗体在体内的半衰期影响了抗体的治疗效果引起人抗鼠抗体(human anti-mouse antibody，HAMA)反应[16-17]。人源化单克隆抗体已经成为治疗性抗体药物研究的重要方向，因此，需研发一种具有广谱抗DENV中和活性的单克隆抗体。

本研究参考 GenBank公布的抗体序列，通过基因工程技术将DENV鼠源单克隆抗体轻重链可变区氨基酸序列与人源抗体轻重链恒定区氨基酸序列合成至pcDNA 3.1(+)载体上，转染CHO-K1细胞进行抗体表达，Protein A亲和纯化后，成功制备了抗DENV人源化单克隆抗体h1A1D，本研究结果对进一步探索DENV致病机制及研发登革热的抗体药物提供参考。……