水疱性口炎病毒核蛋白的纳米抗体和多聚抗核蛋白纳米抗体的原核表达及功能验证

郭玉堃，马英先，常雯茹，明胜利，杨国宇，郭豫杰 (河南农业大学 农业农村部动物生物化学与营养重点开放实验室，河南 郑州 450046)

水疱性口炎(vesicular stomatitis,VS)是由水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV) 引起多种哺乳动物人畜共患的一种急性、高度接触性传染病，马、牛、猪等动物较易感。以舌、唇、口腔黏膜、乳头和蹄冠等处上皮发生水疱为主要特征[1]。VSV 为弹状病毒科、水疱病毒属的成员，VSV 基因组为不分节段的线性单股负链RNA[2]，长约11 kb。从 3′端→5′端依次排列着 N、NS(P)、M、G、L 等 5 个不重叠的基因，分别编码核蛋白、磷酸蛋白、基质蛋白、糖蛋白、及 RNA 聚合酶蛋白[3]。

核蛋白在病毒免疫和诊断上具有重要的意义。核蛋白在不同种群中的保守性很强，且核蛋白抗原性高，进入体内的核蛋白作为优势抗原被 VSV 特异性细胞毒性 T 淋巴细胞识别，发挥杀伤细胞作用，参与免疫反应。刺激机体后会产生非中和抗体[4]，在临床实践中，通过检测核蛋白的抗体就可区分是 VSV 感染还是疫苗免疫，这在 VSV 的临床诊断及防治中具有重要的意义。N 基因编码的病毒核蛋白由 422 个氨基酸残基组成，相对分子质量为 47 kDa。每个病毒粒子含有 1 258 个拷贝[5]。

在 VSV转录和复制的过程中，核蛋白优先和前导 RNA 结合，形成核蛋白 RNA 复合体[6]，该复合体与病毒基因组 RNA 结合，形成了能够保护病毒 RNA 免受核酸酶消化的复合物[7]，作为 RNA 合成的模板。N、P 和 L 是 VSV 转录和复制所必需的3种蛋白[8]，以N-RNA 作为模板，同时以 L 蛋白、P 蛋白作为聚合物进行转录，能够合成结构完整的 RNA 链。因此，N、P 和 L 为干预病毒生命周期提供了可能靶点[9]。……