猪RNA聚合酶Ⅱ单克隆抗体的制备与应用

田小欢，刘 茹，孙 艳,任瑞敏，余 梅,3，赵书红,3，曹建华,3*

(1. 华中农业大学 农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉 430070； 2. 华中农业大学 农业农村部猪遗传育种重点实验室，武汉 430070； 3. 华中农业大学 生猪健康养殖协同创新中心，武汉 430070)

哺乳动物的基因转录主要由RNA聚合酶(RNA polymerase, RNA Pol)执行，可分为Pol Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ 3类。虽然3种酶的结构具有相似性，都是高度保守的多亚基组成复合物，且都具有RNA合成功能，但它们识别不同的启动子区域，并需要一系列启动子特异结合的复合物协同作用才能启动转录[1-2]。RNA Pol Ⅱ(RNAPⅡ或Pol2)作为哺乳动物细胞内最活跃、调节机制最复杂、研究最多的的一类RNA聚合酶，存在于核质中，是由12个亚基组成的分子量为550 ku的巨大复合物[3]，指导mRNA、snRNA、miRNA和1ncRNA等的合成[4]。RNAPⅡ大亚基的羧基末端(Rbp1)具有独特的结构，由Y-S-P-T-S-P-S七肽重复序列组成，称为羧基末端结构域，这段结构在物种间具有保守性。在高等真核生物中，七肽重复52次，丝氨酸2和丝氨酸5是激酶活性的靶点，并经历动态磷酸化循环。RNAPⅡ作为一个巨大的蛋白质复合物，由数十种蛋白质组成，通过各亚基的特异性作用以及基础转录因子和辅因子的协调作用，在转录的起始、延伸和终止等过程中发挥作用，最近有研究证明，RNA聚合酶的亚基有可能也是转录调节因子的额外靶标[5-6]。聚合酶复合物系统协同发挥功能，有效地完成RNA的合成，其研究对于理解生命形式的生长、繁殖和进化至关重要。目前，针对RNAPII的商业化抗体多是多克隆抗体，批次之间存在较大差异，导致在进行免疫学相关试验如ChIP-seq时，产生较高的假阳性信号，极大的影响了结果的准确性，因此亟待需要一种特异性强、结合速度快、无批次差异的单克隆抗体。……