甲胎蛋白AFP的原核表达、纯化及鉴定

王桂玲，冉 皑，吴胜昔，谷志鹏，黄 蕾，龚吕鸿

(重庆理工大学 药学与生物工程学院， 重庆 400054)

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)又称“癌中之王”，是一种常见且致死率极高的恶性肿瘤，在全球恶性肿瘤死亡率中高居第三，严重威胁人类的健康和生命[1]。我国每年约39万人罹患肝癌死亡，数量超过全球肝癌死亡人数的一半。肝癌侵袭力强，经手术切除、肝移植后，患者5年的生存率仅为70%，加上肝癌的预后较差，复发风险较高，因此HCC的早期诊断意义重大[2]。

人甲胎蛋白(alpha-Fetoprotein，AFP)是1个分子量约为70 kDa的糖蛋白，含有591个氨基酸，属白蛋白家族，源于胚胎内胚层组织细胞，主要由胎儿肝细胞及卵黄囊合成[3]。当胎儿发育至12～16周时，可在胎儿的血液循环中检测到高达3 g/L的AFP，妊娠30周达到最高峰，之后逐渐下降。胎儿出生2～3月后，随着干细胞表达下降，体内的AFP转变为白蛋白且在血清中只能检测到微量的AFP蛋白，出生后的第二年接近成人水平，正常人血清中AFP的含量会维持在1个较低水平(<20 μg/L)[4-6]。1964年，前苏联专家Wong等[7]在肝癌患者血清中首次发现AFP，截至目前，AFP被认为是肝癌诊断的最佳生物标志物。肝癌患者表现出临床症状的前8个月时，血清中AFP的含量已经显著升高，因此AFP在临床上广泛用于原发性肝癌的诊断及疗效监测。AFP具有很多重要的生理功能，如运输功能、免疫抑制、T淋巴细胞诱导凋亡、作为生长调节因子的双向调节功能等[8]。血清中AFP浓度的异常增高与多种恶性疾病的发展有密切关系，血清中AFP>400 μg/L并持续一个月以上则提示肝癌高风险。AFP可用于评估肝癌的预后性，浓度升高则提示预后不良。此外，AFP还可用于肝癌高危人群的筛查[9]，乙型肝炎性或丙型肝炎性、肝硬化患者每6个月进行一次血清AFP的跟踪随访和腹部超声。目前，肝癌血清标志物AFP的检测方法主要以抗原抗体发生免疫结合反应为基础，然而国内生产的AFP检测试剂的质量不一，国外进口价格昂贵。因此，制备纯度高、特异性强、成本较低的AFP蛋白可为肝癌的早期快速检测提供有效试剂。……