复方肠泰抑制小鼠结肠癌血管生成及其机制的实验研究

刘静冰，李灵常，余佳霖，魏国利，姜子瑜，霍介格

（南京中医药大学附属中西医结合医院肿瘤科，南京 210028）

结直肠癌是我国发病率和病死率位居第一的消化系统恶性肿瘤，严重威胁居民生命安全。手术、放疗、化疗和靶向治疗是结直肠癌的重要治疗手段，中医药在其综合治疗中发挥着日益重要的作用。复方肠泰系南京中医药大学附属中西医结合医院肿瘤科治疗结肠癌的经验方，已制成院内制剂应用于临床。临床研究表明[1]：复方肠泰联合化疗显著改善肠癌患者临床症状，提高生活质量，降低癌胚抗原（CEA）和糖类抗原19-9（CA19-9）水平，提高T 淋巴细胞分型为代表的多项免疫指标，降低白细胞减少发生率，起到减毒增效作用。课题组前期研究发现，在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）模型中，复方肠泰具有显著抗新生血管生成作用[2]，故本研究以CT26.WT 结肠癌细胞小鼠移植瘤为研究对象，观察其对结肠癌新生血管生成的影响，并初步探讨其作用机制。

1 实验材料

小鼠结肠癌细胞（CT.26WT）：货号C3005，上海冠导生物有限公司。雌性ICR 小鼠：代码201，18 ～20 g，上海斯莱克实验动物有限责任公司。无血清培养基（SFM）：货号17705-021，品牌Gibco，规格500 mL，南京信帆生物。BCA 蛋白定量试剂盒：产品货号KTD3001，品牌Abbkine，武汉艾美捷科技有限公司。Promega M-MLV 逆转录酶：货号M1701，品 牌 普 洛 麦 格。SYBR® Premix Ex TaqTM ：货 号DRR081A，品牌TaKaRa。VEGFR2、AKT、p-AKT、HIF-1α 和GAPDH 一抗：货号分别为#9698、#4691、#4060、#36169 和#5174，品牌Cell signaling。Antirabbit IgG，HRP-linked Antibod 二抗：货号#7074，品牌Cell signaling。复方肠泰处方：人参10 g，黄芪15 g，藤梨根15 g，薏苡仁20 g，苦参6 g，八月札10 g。加10 倍体积水浸泡30 min 后煮2 h，药渣加8 倍水再煮2 h，煎煮液100 目筛网过滤，冷却后2 次滤液经蒸发仪浓缩至220 mL，作为饮片水煎液，生药浓度2.50 g/mL。……