单因素试验优选车前草中大车前苷的提取工艺

吴柱，陈乔杰，罗炳，魏丹丹

（长沙医学院，湖南长沙 410000）

车前草为车前科车前属植物车前或平车前的干燥全草[1]，具有清热利尿、通淋祛痰等功效[2]，车前草中含有大车前苷[3]、桃叶珊瑚苷、高车前苷、熊果酸、车前黄酮苷、车前草苷以及洋工香酚苷[4-5]等多种化学成分，2020版《中国药典》中以大车前苷含量作为车前草药材质量评价标准。本研究通过单因素试验优选车前草中大车前苷的最优提取条件，旨在为车前草开发应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器

P1202型高效液相色谱仪，大连依利特分析仪器有限公司；AL204电子天平，梅特勒-托利多公司；DF-101S恒温加热磁力搅拌器，巩义予华仪器有限公司；KQ300E超声波清洗机，昆山市超声仪器有限公司。

1.2 试剂

大车前苷对照品，埃法生物科技有限公司，CAS号为104777-68-6；车前草，泰和中药饮片有限公司，批号为19081601；乙腈、甲醇，色谱纯，国药集团化学试剂有限公司；甲醇、甲酸，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；无水乙醇，分析纯，天津市化学试剂厂；纯化水，自制。

1.3 色谱条件

色谱柱WondaSil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相A：乙腈；流动相B：0.1%甲酸-水溶液；梯度洗脱（0～5 min，19%A；6～10 min，19%～25%A；10～15 min，25%A；15～20 min，25%～45%A，20～30 min，45%A）；波长：330 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：20 μL。

1.4 溶液的制备

称取大车前苷对照品10.03 mg，放入10 mL容量瓶中，加甲醇定容，得浓度为1.003 mg/mL大车前苷对照品溶液。

1.5 标准曲线的绘制

取大车前苷对照品溶液，置于10 mL容量瓶中，分别制成 50.15 μg/mL、100.30 μg/mL、200.60 μg/mL、401.20 μg/mL 和 601.80 μg/mL 对照品溶液，按“1.3”项下色谱条件进样，记录数据。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标得到线性回归方程为y=13.075x+32.838（R2=0.9992），大车前苷HPLC色谱图如图1所示。结果表明大车前苷在50.15～601.80 μg/mL浓度范围内线性关系良好，本方法可用于大车前苷含量测定。……