miR-22-3p/5p抑制小鼠成肌细胞增殖的功能研究

盖 凯，丛百林，陈 鹏，齐晓龙，邢 凯，王相国，肖龙菲，

倪和民，郭 勇，杨佐君*，盛熙晖*

(北京农学院 动物科学技术学院，北京102206)

在骨骼肌生长发育过程中，肌肉前体细胞通过分裂增殖和细胞分化，成肌细胞的迁移、相互黏附与融合产生多核肌纤维，最后通过进一步分化形成骨骼肌。microRNAs(miRNAs)，一类非编码核糖核酸，已被发现在动物骨骼肌发育过程中发挥重要作用，例如miR-378a、miR199a和miR-206等[1-3]。mmu-miR-22定位于小鼠11号染色体，其前体可以产生2个成熟miRNA，即分别从前体的5’和3’端加工而来的miR-22-5p和miR-22-3p。研究表明，miR-22-5p/3p是很多癌症的诊断标记物,分别与急性心肌梗塞[4]、乳头状甲状腺癌[5]、短暂性脑缺血[6]、卵巢癌[7]、肝癌[8]、膀胱癌[9]和非小细胞肺癌[10]等相关，但在骨骼肌发育过程中二者发挥的生物学功能尚不明确，具体的作用机制和调控网络尚未彻底阐明。为了研究mmu-miR-22-3p/5p在骨骼肌细胞生长发育过程中的作用，选择可以在低血清诱导条件下分化为多核肌管的小鼠成肌细胞(C2C12)作为细胞模型，通过转染mmu-miR-22-3p/5p的模拟物，应用CCK-8法与流式细胞术两种方法研究mmu-miR-22-3p/5p在小鼠成肌细胞在增殖过程中的作用，探究miR-22-3p/5p的生物学功能，目的是阐明miRNAs调控家畜骨骼肌生长发育的分子机制。

1 材料与方法

1.1 细胞及主要试剂

C2C12细胞购自于国家试验室细胞资源共享平台。mmu-miR-NC、mmu-miR-22-3p/5p模拟物由上海吉玛制药技术有限公司合成。转染试剂脂质体Lipofectamine 2000和细胞裂解液Trizol均采购于美国Invitrogen公司。OPti-MEMI低血清培养基购自美国Gibco公司。细胞增殖-毒性检测试剂盒 Cell Counting Kit-8(CCK-8)购自北京索莱宝科技有限公司。实时荧光定量PCR试剂购自北京宝日医生物技术有限公司。……