变异型PEDV北京分离株ELISA检测法的建立

夏 婷，郭娇娇，廖晨星，阮文科

(北京农学院 动物科学技术学院，北京 102206)

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea disease，PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)感染猪导致呕吐、腹泻，最后脱水死亡的一种传染性极高的肠道疾病。该病对于所有猪均易感，具有严重的危害性，给世界生猪市场造成了不可估量的损失[1-2]。PED与猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis of swine，TGE)等在流行病学、临床症状、病理变化上都极其相似，但二者并无血清学交叉反应，属于新的PEDV成员。

接种疫苗是该病预防的重要手段，目前的流行毒株基因序列变异大，使疫苗临床效果不明显，疫情在大规模爆发时难以得到有效控制，研究发现，2010年以后的分离株都有核苷酸的变异，主要集中在S1的N端，经过比对后发现，突变特点为T、C碱基的互换，解释了疫苗无效的原因，给予重新建立疫苗株的提示[3]。

除接种疫苗预防PEDV外，找到一种更有效的免疫监测猪群抗体水平和监控PEDV疫情的方法也很重要，本研究旨在以北京地区流行毒株的S基因为基础，建立一种PEDV的间接ELISA抗体检测方法，方便PED样本的批量检测和快速诊断。

1 材料与方法

1.1 材 料

猪流行性腹泻病的病料、表达载体PET-32a由兽药与疫病防控分子生物学实验室保存；BL21(DE3)菌株购自鼑国昌盛生物技术有限公司；T1噬菌体感受态细胞、克隆载体T5，T4 DNA连接酶、Taq DNAPolymerase、DNA Marker、Protein Marker、Trizol LS Reagent购自全式金生物技术有限公司；标准猪阳、阴性血清购自华佰泰生物技术有限公司；猪阳性血清来自北京大兴区某猪场；猪阴性血清来自SPF猪育种管理中心；猪抗CSFV，PRV，PRRSV，TGEV，PCV阳性血清购自华佰泰生物公司；……