黄芪多糖调控Sirt1/FoxO1 通路抑制多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬的研究

阳 丽,吴 湘,李 昂,何薇薇

(湖南省妇幼保健院,长沙 410008)

多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是临床常见妇科内分泌疾病,会导致内分泌系统紊乱,而PCOS 中出现卵巢颗粒细胞明显凋亡情况,而凋亡与自噬之间存在较多交叉位点,且自噬参与许多生理病理过程[1-2]。 卵巢颗粒细胞自噬可影响卵泡发育和卵泡闭锁,从而影响生育功能[3]。 黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)在黄嘌呤氧化酶诱导的肺癌中可以抑制自噬从而发挥抗肿瘤作用[4],但在PCOS 中尚未发现相关研究。沉默信息调节因子1/叉头状转录因子O1(silent mating type information regulation 2 homolog 1/forkhead box transcription factor O1,Sirt1/FoxO1)作为自噬相关通路在PCOS 卵巢组织中处于激活状态,可以通过对颗粒细胞、卵泡细胞的调控从而抑制卵泡正常发育过程[5],且本研究预实验结果显示PCOS 中颗粒细胞自噬现象明显。 APS 是否影响PCOS 大鼠颗粒细胞自噬尚不清楚。 因此,建立PCOS 大鼠颗粒细胞自噬模型,探究APS 对其影响,为临床提供一定依据。

1 材料和方法

1.1 实验动物

3 只 SPF 级雌性 SD 大鼠,6 周龄、体重 190~210 g,购自北京维通利华实验动物有限公司[SCXK(京)2016-0011],饲养在中南大学湘雅二医院[SYXK(湘)2017-0002]。 在温度 24℃ ~25℃、湿度50%~60%、自然光照、自由摄食饮水,定时通风环境中饲养。 本实验动物使用3R 原则给予人道关怀,经湖南省妇幼保健院伦理委员会审核批准(2020-S061)。

1.2 主要试剂与仪器

孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)(上海生物化学制药厂,批号:820120);CCK8 试剂盒、一抗促卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)、Sirt1、FoxO1、哺乳动物同族物微管相关蛋白1 轻链 3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、β-actin(美国 abcam 公司,货号分别为:ab228554、ab150557、 ab189494、 ab58518、 ab229327、ab179467);丙酸睾丸酮(中国 aladdin 科技公司,CAS 号:57-85-2);自噬诱导剂C2-神经酰胺(美国Sigma 公司,批号:A7191);APS(纯度90%)(中国上海源叶生物科技公司,批号:20170316)。……