高黏液表型与基因型预测肺炎克雷伯菌毒力的比较

马明葱，李晓雨，卓 超

(1. 东莞市第一人民医院呼吸内科，广东 东莞 523000； 2. 广州医科大学附属第一医院呼吸内科，广东 广州 510000)

肺炎克雷伯菌属于革兰阴性杆菌，可引起多系统感染[1]。与经典肺炎克雷伯菌(classicKlebisellapneumonia，CKP)相比，高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulentKlebsiellapneumoniae，hvKp)受到广泛关注，不仅可引起细菌性肝脓肿[2]，还可引起脑膜炎、坏死性筋膜炎和眼内膜炎等转移性感染[3-4]。hvKp菌株在琼脂平板上的菌落表现为高黏液性(hypermucoviscous，hm)[5]，可引起严重的转移性感染[6]。但也有小鼠试验表明，仅少数(1/5)高黏液表型菌株表现为高毒力[7]。因此，不能仅以高黏液表型区分hvKp与CKP菌株。研究高黏液表型以及基因型预测hvKp的可靠性，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 菌株来源 2016年11月—2018年4月广东省4所医院收集多种标本(包括血液、引流液、尿等)来源的肺炎克雷伯菌。将收集的菌株应用Vitek全自动微生物分析仪进行鉴定。初次鉴定后再经16S rRNA基因测序鉴定。

1.2 拉丝试验 用接种环蘸取生长在LB(购自广东环凯微生物科技有限公司)琼脂平板上的新鲜肺炎克雷伯菌菌落，将接种环向上提起，若菌落形成的黏丝长度>5 mm，则判定为拉丝试验阳性，称为高黏液表型肺炎克雷伯菌(hypermucoviscousKlebsiellapneumoniae，hmKp)；反之则为阴性，称为非高黏液表型肺炎克雷伯菌(non-hypermucoviscousKlebsiellapneumoniae，non-hmKp)[5]。

1.3 血清荚膜分型与毒力基因检测 采用煮沸法提取菌株DNA模板，PCR扩增特异性引物(血清型K1、K2、K5、K20、K54、K57及毒力基因rmpA、rmpA2、magA、iucA等18个毒力基因)参照文献[8]合成。PCR体系：PCR上下游引物(引物浓度10 pmol/μL)各1.0 μL，Premix 12.5 μL(购自北京六合华大基因科技有限公司)，超纯水9.5 μL，DNA模板1.0 μL，总共25.0 μL。PCR扩增阳性产物送北京六合华大基因科技有限公司进行双脱氧末端终止法(也称sanger测序法)测序，GenBank 进行 Blast 比对双测序结果，进而获得相应基因型。