羟基红花黄色素A对非酒精性脂肪肝炎细胞的作用

张华敏，刘娜，邓巧娟

（广东医科大学附属医院，广东 湛江 524000）

非酒精性脂肪性肝病（non alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是指除病毒或酒精等因素引起的肝损伤，国内目前有超过1.5亿患者，其中20%~40%患者发展为非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）[1-2]。细胞焦亡是近年来发现并证实的一种新的程序性细胞死亡方式，目前已有研究表明细胞焦亡在NASH的发展中起着至关重要的作用[3-4]。

羟基红花黄色素A是一种单查尔酮类化合物，具有抗氧化、抗凋亡、抗炎症、抗血小板凝集等活性。LI Y N[5]等研究表明羟基红花黄色素A对于肝纤维化有一定的疗效。HE Y[6]等研究表明羟基红花黄色素A对大鼠酒精性肝损伤具有保护作用。本研究采用游离脂肪酸（free fatty acid，FFA）处理L-02细胞建立NASH细胞模型，在此基础上观察和测定羟基红花黄色素A对NASH的影响，并探寻其作用机制是否与肝细胞细胞焦亡有关，从而为NASH的临床治疗研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 细胞L-02细胞系购于中科院上海细胞库，将细胞解冻后离心，加入DMEM培养基，于37℃，5%CO2条件下培养。

1.2 药物与试剂 羟基红花黄色素A（上海士锋生物科技有限公司，货号：78281-02-4，纯度≥98%）；DMEM（美国Gibco公司，货号：12100046）；胎牛血清（美国Gibco公司，货号：16000044）；油红O染色液（上海生工，货号：E607319-0010）；油酸（上海生工，货号：A502071-0250）；棕榈酸（上海纯优生物，货号：P0687）；一步法反转录荧光定量试剂盒（上海生工，货号：B639277-0050）；Trizol（上海生工，货号：B610409-0025）；炎症小体感受器分子NOD样受体蛋白3（NOD-like receptor protein 3，NLRP3）兔单克隆抗体（艾博抗公司，货号：M00034）；半胱氨酸蛋白酶1（Cysteinyl aspartate specific proteinase 1，Caspase-1）兔单克隆抗体（艾博抗公司，货号：ab207802）；消皮素D（Gasdermin D，GSDMD）兔单克隆抗体（艾博抗公司，货号：ab209875）；白细胞介素-18（IL-18）兔多克隆抗体（艾博抗公司，货号：ab207324）；……