浅谈基层开展荧光PCR试验的注意事项

高爱萍

（江苏省徐州市畜牧兽医站 221000）

近几年，随着生物技术的迅猛发展，分子生物学技术在各行各业得到广泛应用，PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称，是上世纪80年代中期发展起来的一种体外扩增技术，用于放大特定的DNA片段，该技术在体外可在短时间内获得大量特定目的基因片段，通过DNA基因追踪系统能迅速掌握体内的病毒含量，其精确度高达纳米级，从而大大简化了传统的分子克隆技术。而实时荧光定量PCR是一种在DNA扩增反应中通过荧光信号对PCR进程进行实时检测的技术，在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，成为定量依据。实时荧光定量PCR具有敏感，快速，高通量，简便、自动化程度高等突出优势，目前已成为疫病流行病学调查中病原检测及病原学诊断的常规操作技术之一。

随着我国畜牧养殖业的发展，及畜禽进出口贸易的加大，动物疫病也不断发展，尤其是近几年非洲猪瘟、小反刍兽疫、牛结节病等外来疾病的侵入，给传统的实验室诊断和流行病学调查带来严峻挑战，为应对这一形式，实时荧光定量PCR技术在实验室诊断和流行病学调查中得以广泛应用。但该实验条件、技术要求高，目前虽然一部分基层实验室具备了实时荧光定量PCR检测技术的资质，也得到农业农村部及省级主管部门通过不同方式的考核及授权，能开展实时荧光定量PCR技术检测工作，但在实际检测工作的各个环节仍存在很多……