实时荧光定量PCR技术在生物饲料中的应用

康凌宇， 倪 忠， 武俊明， 陈华友*

（1.江苏大学生命科学学院，江苏镇江 212000；2.江苏中兴药业有限公司，江苏镇江 212000）

随着我国畜牧饲料行业的发展，生物饲料成为研究热点之一。生物饲料是通过基因工程、蛋白质工程、发酵工程等现代生物技术开发的新型饲料产品 （蔡辉益等，2014），在提高动物的生产性能、饲料的适口性和消化率，降低抗生素使用，降低发病率和提高成活率方面展现出巨大的潜力。发酵菌种是生物饲料的重要组成部分，特色功能菌株的筛选、菌株的组合效果是生物饲料产业化的研究方向。近年来，实时荧光定量PCR技术因其独特的优点，被广泛应用于基础科学研究、转基因产品和食品安全检测、医学诊断等研究实践领域，但在生物饲料的检测中应用较少，与传统的基于微生物培养的检测方法相比，实时荧光定量PCR技术更加省时省力。因此，本文对实时荧光定量PCR的原理、技术分类和在生物饲料中的应用进展进行综述，并总结了实时荧光定量PCR在生物饲料实验中的注意事项。

1 实时荧光定量PCR的原理

实时荧光定量PCR（qPCR）是以常规PCR为基础的一种新型核酸定量技术。其原理是在反应体系中加入荧光化学物质，随着PCR反应过程中扩增产物不断积累，荧光信号强度也等比例增加，通过荧光信号变化实时监测整个PCR反应进程，将结果绘制成荧光扩增曲线图，从而定量定性分析起始模板。PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，在荧光信号指数扩增阶段，荧光信号达到阈值，且荧光信号远高于背景信号，这种情况下产生的循环数称为Ct值，通过Ct值对起始模板进行定量分析（Kozera等，2013）。……