茶树原生质体制备体系的研究进展

叶晶晶 赵 东 梁月荣 陆建良 郑新强

(浙江大学茶学系，杭州 310058)

茶树(Camelliasinensis(L.) O. Kuntze)特征性次生代谢产物丰富，属于重要的经济作物[1]，目前新品种的培育仍以传统的育种方式为主，育种效率低，定向育种技术薄弱。通过基因功能鉴定和克隆技术，与次生代谢产物相关的遗传编码陆续被成功破译，但茶树的遗传背景相对复杂，基因功能的研究明显滞后。与传统的遗传转化系统相比，瞬时过表达/抑制为体内基因功能分析提供了一种方便的替代方法。原生质体可广泛应用于植物瞬时表达分析。基于原生质体的表达系统不仅可用于酶活性测定，也可用于亚细胞定位分析，还可以用来研究蛋白质-蛋白质相互作用和转录激活，而且原生质体是克服远缘杂交障碍、创新品种的重要载体[2]。

原生质体早在1892年就由Klercker[3]通过机械法从水剑叶叶片中获得，但一直到1960年，Cocking[4]利用酶解法从番茄根尖获得产量大活力高的原生质体，原生质体制备研究才真正开始。目前，许多模式植物和粮食作物例如烟草[5]、拟南芥[6]、玉米、小麦、水稻[7]等的原生质体分离技术已经非常完善，应用领域在不断拓宽。

Rona[8]于1972年利用酶解法建立了欧亚槭的原生质体再生体系，开创了木本植物的原生质体培养先河。目前，桑树[9]、柑橘[10]、苹果[11]、枇杷[12]、橙[13]、中国李[14]、狗头枣[15]、柿[16]、山杏[17]、荔枝[18]、菠萝[19]、草莓[20]等多种园艺植物的原生质分离、培养及融合等研究工作已取得重要的进展。此外，一些具有经济价值的木材和能源树种，例如银杏[21]、橡胶树[22]、油桐[23]、日本榧[24]、国槐[25]、油棕[26]等以叶片为材料在原生质体制备方面也有了很大的进步。……