Vibrio sp.FG1琼胶酶的分离纯化及酶学性质研究

张力雄，刘明明，方再光

琼胶是一种特殊的海藻多糖，可从石花菜等红藻类植物中提取出来，是海洋红藻类植物细胞壁的一种粘性多糖，由于其独特的凝固性和稳定性等优良性质使其极具经济价值［1］.琼胶酶是一种糖苷水解酶（GH）类，能够特异性降解琼胶，其水解产物是琼胶寡糖［2］.根据作用方式的不同可以把琼胶酶分为两类：α-琼胶酶和β-琼胶酶［3］.琼胶酶产生菌的来源有海水、海洋软体动物、海洋沉积物、土壤及海藻等，海洋环境成为其最主要来源［4］.目前，已报道多种琼胶酶产生菌，包括假单胞菌属（Pseudomonas sp.）［5］、交替单胞菌属（Al⁃teromonas sp.）［6］、噬纤维菌属（Cytophaga sp.）［7］、弧菌属（Vibrio sp.）［8］、不动杆菌属（Acinetobacter sp.）［9］、噬琼胶菌属（Agarivorans sp.）［10］和 类 芽孢杆菌属（Paenibacillus sp.）［11］等.

琼脂的降解产物琼寡糖和新琼寡糖在食品、保健品、水产养殖业、生物实验中的应用前景广泛，一方面使海藻具有免疫防御和诱导抗逆性的作用；另一方面使动物具有体内抗氧化、抗紫外线、提高保鲜度的作用，并改善人类肠道微生物菌群、促进益生元.探究琼胶降解菌发酵工艺、琼胶酶分离纯化方法，以及重组酶高表达载体构建是实现琼寡糖产业化的重点.本实验通过发酵、超滤浓缩、透析、凝胶柱层析对琼胶酶FG1进行分离纯化，并优化酶解反应条件，为日后高纯度琼胶酶的制备以及琼胶酶分子结构的研究和琼胶寡糖的大量制备奠定基础.

1 材料与方法

1.1 材料

（1）菌株.本实验室从海南陵水热带海洋环境中分离筛选出菌株FG1.

（2）培养基.X培养基（优化后的2216E海水培养基［12-14］）：0.5%蛋……