新疆地区A型产气荚膜梭菌α毒素蛋白的原核表达

苏 燕，苏 艳

（1.新疆农业大学 动物医学学院，新疆 乌鲁木齐 830052；2.新疆医科大学第八附属医院，新疆 乌鲁木齐 830052）

产气荚膜梭菌是主要分布于人畜粪便及肠道中的一类厌氧的条件性致病菌，最早称为魏氏梭菌，该菌在分解动物组织的糖分时会产生大量气体，且绝大部分菌株在生长过程中都有荚膜形成，因而称之为产气荚膜梭菌[1]。产气荚膜梭菌在世界各地都有存在，给全球养殖业的发展带来了严重影响[2]。其致病性主要来源于产气荚膜梭菌分泌的毒素，不同毒素的致病机制不同，在众多外毒素中α、β、ε和ι是最主要的[3]，这4种外毒素会对机体产生严重的毒害作用，威胁着人和动物的健康[4,5]。现阶段将产气荚膜梭菌分为A、B、C、D、E、F、G7个细菌型[6]，其中A型和C型对人的致病性极强[7]。所有的产气荚膜梭菌都分泌α毒素，A型菌分泌的α毒素量最大[8]。研究新疆地区产气荚膜梭菌α毒素蛋白对该区域产气荚膜梭菌病的流行以及防治具有指导作用。

1 材料与方法

1.1 材料及试剂

质粒pET-30a载体（实验室保存），商品化的感受态，质粒和基因组提取试剂盒、快切酶、T4快速连接酶，过硫酸铵、丙烯酰胺、青霉素、还原性谷胱甘肽、诱导剂（IPTG）、低温离心机等。

1.2 设计引物

在NCBI网址中下载编码α毒素基因序列，并去掉信号肽片段，该基因共计927 bp，设计α毒素基因的引物，将设计好的基因引物送至生工生物工程（上海）股份有限公司进行合成，引物序列如表1所示，引物稀释后冻存。

表1 产气荚膜梭菌α毒素基因引物序列

1.3 扩增α毒素基因

用培养24 h后的A型产气荚膜梭菌提取基因组，并以此为模板，用1.2合成的引物PCR扩增α毒素基因，将扩增产物加至1.2%琼脂糖凝胶孔中，待电泳结束后回收α毒素基因片段。……