MicroRNA-342 和FOXP1 mRNA 在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义

谭国胜， 林方增， 陈斌， 蔡鸿杰， 罗灿峤， 戴海涛

（中山大学附属第一医院 1 放射介入科， 2 肝外科， 3 病理科， 广东 广州510080）

MicroRNAs （miRNAs） 属于非编码小RNA， 参与调控肿瘤细胞的凋亡、 增殖、 迁移等［1］。 miRNAs 的表达失调或异常可促 进 原 发 性 肝 细 胞 癌 （HCC） 的 发 生［2］。 MicroRNA－342（miR－342） 与HCC 发生及发展相关这一现象近年来不断有所报道。 转录因子FOXP1 （叉头框蛋白P1） 存在于包括HCC 的多种肿瘤中［3］， 且与肿瘤生物学行为相关。 本研究拟通过检测HCC 标本中miR－342 及FOXP1 mRNA 的表达含量， 分析肿瘤组织及瘤旁组织中的表达差异及其相关性， 初步探讨miR－342及FOXP1 在HCC 发生、 发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料及组织标本收集我院经外科手术后病理学确诊的58 例HCC 患者的肿瘤组织和癌旁组织标本。 本研究通过我院临床科研伦理委员会批准。 患者平均年龄 （55 ± 7.5） 岁，中国肝癌分期Ⅰ～ Ⅲ期， 术前均无接受放化疗及靶向治疗等抗肿瘤治疗。 肿瘤组织取材方法： 距肉眼可见的肿瘤边缘0.5 cm以上的瘤体组织内随机取样， 标本大小约1.0 cm × 1.0 cm × 1.0 cm。 癌旁组织取材方法： 距离肿瘤边缘≥1.0 cm 切取的肝脏组织， 取样标本大小同上。

1.2 检测miR－342表达水平TRIzol 法分别提取肿瘤组织和癌旁组织细胞的总RNA， 用逆转录试剂盒将RNA 反转录成cDNA。PCR 定量检测采用Hairpin-itTMmiRNAs qPCR Quantitation kit 试剂盒。 合成用于特异扩增的MicroRNA 引物， PCR 检测miR－342 含量。 以U6 作为内参， PCR 操作和反应条件参照文献［4］和试剂盒说明书， 2－△△Ct法计算miR－342 的相对表达量。

1.3 检测FOXP1 mRNA 表达水平肿瘤组织和癌旁组织总RNA的提取和反转录的操作方法同上。 应用SYBR Green PCR Master Mix 试剂盒， 以相应引物行qPCR 检测两组标本细胞中FOXP1 的mRNA 表达水平。 PCR 操作和反应条件参照试剂盒说明书。……