江西汉族人群散发颅内动脉瘤的影响因素及其对ELN、LIMK-1基因多态性的影响

吴明超 罗懿 熊燕 曹铭华

[摘要] 目的 探討江西汉族人群散发颅内动脉瘤的影响因素及其对弹性蛋白（ELN）、LIM 激酶1（LIMK-1）的影响，为临床提供一定的理论参考。 方法 回顾性分析2016年6月至2020年6月我院收治的江西汉族散发颅内动脉瘤患者100例及同期收治的100名健康人群临床资料，分别视为疾病组和对照组，同时测定ELN、LIMK-1基因片段，分析散发颅内动脉瘤的危险因素，比较两组基因多态性差异。 结果 两组在性别、年龄、血压水平、血糖水平、吸烟频率、家族史方面比较，差异有统计学意义（P<0.05）。Logistic多因素回归分析显示，高龄、高血压、高血糖、高吸烟频率、家族史是颅内动脉瘤的独立危险因素（P<0.01）。两组ELN基因的 3'-UTR（+502）、3'-UTR（+659）和LIMK-1基因的Pro（-961）、Pro（-428）、Pro（-187）五个位点的分布频率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 高龄、高血压、高血糖、高吸烟频率是颅内动脉瘤发病的危险因素，ELN、LIMK-1基因多态性对江西汉族人群颅内动脉瘤有明显的影响。

[关键词] 颅内动脉瘤;江西汉族;基因多态性;弹性蛋白;LIM 激酶1

[中图分类号] R743.4          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2021）28-0063-04

Influencing factors of sporadic intracranial aneurysms and their effects on ELN and LIMK-1 gene polymorphisms in Han population in Jiangxi Province

WU Mingchao   LUO Yi   XIONG Yan   CAO Minghua

Department of Neurology， Jingdezhen First People′s Hospital in Jiangxi Province， Jingdezhen   333000， China

[Abstract] Objective To explore the influencing factors of sporadic intracranial aneurysms in Han population in Jiangxi Province and their effects on ELN and LIMK-1， so as to provide certain theoretical reference for clinical practice. Methods Clinical data of 100 sporadic intracranial aneurysm patients and 100 healthy people who were admitted to our hospital from June 2016 to June 2020 were retrospectively analyzed， and treated as the disease group and the control group， respectively. At the same time， ELN and LIMK-1 gene fragments were detected to analyze the risk factors for sporadic intracranial aneurysms， and the differences of gene polymorphism between the two groups were compared. Results Statistically significant differences were observed in gender， age， blood pressure level， blood glucose level， smoking frequency and family history between the two groups（P<0.05）. Logistic multivariate regression analysis showed that the advanced age， hypertension， hyperglycemia， high smoking frequency and family history were independent risk factors for intracranial aneurysms （P<0.01）. The 3′-UTR （+502）， 3′-UTR （+659） of ELN gene and the five gene loci， Pro （-961）， Pro （-428） and Pro （-187） of LIMK-1 gene were significantly different between the two groups （P<0.05）. Conclusion The advanced age， hypertension， hyperglycemia and high smoking frequency are risk factors for intracranial aneurysms. ELN and LIMK-1 gene polymorphisms are significantly effects on intracranial aneurysms in Han population in Jiangxi Province.

[Key words] Intracranial aneurysm; Han population in Jiangxi Province; Gene polymorphism; ELN; LIMK-1

颅内动脉瘤在临床上较为常见，约占全部肿瘤疾病的2%，其中3%～6%的30岁以上人群带有无症状的未破裂动脉瘤[1-2]。对颅内动脉瘤发病患者而言，30 d內病死率为46%[3]。需要注意的是，若颅内动脉瘤患者未发生破裂，且能够及时治疗，只有不到3.5%的病死率和6%的致残率，故对颅内动脉瘤早期诊断成为治疗的关键[4]。尽管颅内动脉瘤的发病率高，并且破裂后的后果非常严重，但对颅内动脉瘤的发病机制目前仍不能完全明确。为此，本研究通过收集100例动脉瘤患者及与其匹配的健康志愿者血样，记录相关基本资料，同时进行生化指标及基因检测，探讨性别、年龄、高血压、吸烟、血糖及ELN、LIMK-1基因多态性与江西汉族人群散发颅内动脉瘤的相关性，为临床颅内动脉瘤的早期诊断提供参考依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

选取我院2016年6月至2020年6月收治的100例颅内动脉瘤患者及来自我院体检中心的健康人员100名的临床资料进行回顾性分析，分别视为疾病组和对照组。疾病组男35例，女65例;年龄26～78岁，平均（62.31±3.16）岁;血压水平90/120 mmHg 4例，90～110/121～139 mmHg 52例，110/140 mmHg 44例;血糖水平<7 mmol/L 6例，7～10 mmol/L 50例，>10 mmol/L 44例;吸烟频率<5支/d 16例，5～15支/d 64例，>15支/d 20例;家族史有43例，无57例。对照组男52例，女48例;年龄23～76岁，平均（62.96±3.20）岁;血压水平90/120 mmHg 16例，90～110/121～139 mmHg 60例，110/140 mmHg 24例;血糖水平<7 mmol/L 15例，7～10 mmol/L 65例，>10 mmol/L 20例;吸烟频率<5支/d 29例，5～15支/d 60例，>15支/d 11例;家族史有53例，无47例。

所有入选者之间无血缘关系，此研究已获得景德镇市第一人民医院医学伦理委员会的同意，所有参加者均签署知情同意书，无法签署者由直系亲属代签。纳入标准：①均经头部核磁共振血管成像（MRA）、计算机断层扫描血管成像（CTA）或数字减影血管造影（DSA）等明确诊断[5];②精神和认知正常，意识清晰，可配合完成基本调查研究;③自愿参与，签署知情同意书。排除标准：①健康体检者排除颅内动脉瘤及蛛网膜下腔出血者;②合并其他系统恶性肿瘤者。

1.2 方法

（1）血标本采集：待受检者签署同意书后，采集10 mL肘静脉血备用，经EDTA抗凝后，保存于4℃的冰箱中。（2）基因组DNA 的制备及测定：①采用传统酚/氯仿抽提法提取血液基因组DNA（gDNA）;②基因组DNA 浓度及纯度的鉴定：取稀释后1 μL DNA 溶液，使用微量Thermo 2000 C 紫外分光光度计测定吸光度OD 260/280 nm 值及全基因组DNA 的浓度。（3）ELN、LIMK-1基因SNPs 位点引物的设计及合成：在NCBI 网站GeneBank SNP数据库下载ELN、LIMK-1基因的筛选出的5个SNPs 位点[3'-UTR（+502）、3'-UTR（+659）及LIMK-1基因的Pro（-961）、Pro（-428）、Pro（-187）]相对应的基因组DNA序列。所有引物合成委托上海生工生物有限公司合成。（4）基因分型：①聚合酶链反应（PCR）;②水平多聚糖凝胶电泳验证PCR扩增产物;③PCR 扩增产物使用混合纯化酶纯化;④SNaPshot 单碱基延伸法测序。（5）基因型判读：如封三图6所示。（6）引物序列参照文献[6]。PCR 扩增产物测序验证：用ELN、LIMK-1基因，ELN、LIMK-1基因和基因位点正反向引物法直接双向测序。

1.3观察指标

分析江西汉族人群颅内动脉瘤发生的危险因素，了解ELN、LIMK-1 基因多态性对江西汉族人群散发动脉瘤的影响。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件对数据进行分析，计数资料以[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 影响江西汉族人群颅内动脉瘤的单因素分析

两组在性别、年龄、血压水平、血糖水平、吸烟、家族史各资料方面比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2相关因素的赋值

相关因素赋值情况如表2所示。

2.3江西汉族散发颅内动脉瘤的多因素回归分析

Logistic多因素回归分析显示，高龄、高血压、高血糖、高吸烟频率、家族史是江西汉族散发颅内动脉瘤的独立危险因素（P<0.01）。见表3。

2.4两组基因多态性差异的比较

两组ELN基因的 3'-UTR（+502）、3'-UTR（+659）和LIMK-1基因的Pro（-961）、Pro（-428）、Pro（-187）五个位点的分布频率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。

3 讨论

颅内动脉瘤是临床常见病和多发病，具有较高的发生率，会对人们的健康乃至生命安全构成巨大的威胁，早已引起社会的广泛关注。手术治疗是颅内动脉瘤的常见治疗方式，科學合理地实施手术方案，对患者健康的改善有十分积极的意义。手术治疗受到的影响因素诸多，加强对颅内动脉瘤的影响因素调查分析，可对治疗的进程产生积极的影响。为此，本研究就相关内容展开分析。在针对颅内动脉瘤的危险因素进行分析后发现，高龄、高血压、高血糖、高吸烟频率、家族史是江西汉族散发颅内动脉瘤发病的独立危险因素（P<0.01），因此对于江西汉族人而言，应当从上述因素着手，加强对散发颅内动脉瘤的防治，做到具体问题具体分析。

至今，颅内动脉瘤的发病机制并不明确，学界对于其发病机制的探讨仍在进行[7]。目前，基因研究是颅内动脉瘤研究的重要方向之一。全基因组关联研究已证实染色体4q31.23 上的EDNRA基因、染色体8q12上SOX基因、染色体9p21.3上的CDKN2A/CDKN2B/CDKN2BAS（ANRIL）基因、染色体10q24.32上的CNNM 2基因、染染色体18q11.2上的RBBP8基因及染色体12q22与颅内动脉瘤的易感性相关[8]。但由于复杂的连锁不平衡，种族构成不同和潜在的遗传变异与环境因素相互作用不同，同一种基因变异影响的大小根据种族不同而有差异，所以目前尚未找到与所有种族颅内动脉瘤均相关的变异基因位点[9]。因此，对于颅内动脉瘤的基因研究仍旧需进一步深入。

ELN基因位于7p11区，跨度约45 Kb，包含34个外显子，不仅能编码弹性蛋白，还能编码Ⅰ型胶原蛋白A2[10]。弹性蛋白为一种细胞外基质的结构蛋白，可以作为小分子物质，调控血管内皮细胞生成和平滑肌细胞的增殖[11-12]。LIMK-1是7p11 区上紧邻弹性蛋白基因的另一个与颅内动脉瘤相关基因，含有39 499 个碱基，具有16 个外显子，该基因产生信使mRNA，可编码LIMK-1 蛋白[13-14]。目前ELN 基因多态性与动脉瘤的相关性在欧洲、芬兰、英国等欧美国家的病例对照分析中显示相关，但是在日本、韩国及国内的几篇文章中结论并不一致[15]。而LIMK-1基因，为近几年发现的与颅内动脉瘤发生相关的新候选基因，目前国内并无此基因与颅内动脉瘤相关性的报告。进一步分析发现，观察组ELN基因的 3'-UTR（+502）、3'-UTR（+659）以及LIMK-1基因的Pro（-961）、Pro（-428）、Pro（-187）五个位点的分布频率与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05），表明ELN、LIMK-1基因多态性对江西汉族人分群颅内动脉瘤有明显的影响。但是本研究也存在一定的不足，如纳入研究的样本数量不是非常多，可能对研究的结果产生一定影响，因此在今后的研究过程中应加以改进。

综上所述，高龄、高血压、高血糖、高吸烟频率、家族史是江西汉族颅内动脉瘤发病的危险因素，ELN 与LIMK-1基因是与颅内动脉瘤相关的候选基因，对江西汉族散发颅内动脉瘤有明显的影响。

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（收稿日期：2021-02-23）