miR-145 对三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及转移能力的影响

朱凌霄 张 兰 张雪鹏 李昊鑫

华北理工大学附属医院肿瘤外科，河北唐山 063000

三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）是乳腺癌中一种难治性亚型，由于缺乏特异性受体，目前TNBC 主要采用传统的化疗和手术治疗，但预后较差，所以寻找新的治疗手段，尤其是靶向治疗是目前的研究热点[1-2]。微RNA（microRNA，miRNA）是强大的“基因调节剂”，其中miR-145 作为表达较为显著的一类抑癌基因，可抑制TNBC 的增殖、转移及侵袭[3-4]。本课题组前期发现，miR-145 通过调控解聚素-金属蛋白酶17（adisintegrin and metalloproteinase 17，ADAM17）可影响MCF-7 乳腺癌细胞的增殖和侵袭[5]。为进一步观察其在TNBC 中的作用，本研究在降低TNBC 细胞中miR-145 的表达水平后，通过测定和分析下游ADAM17 及与其密切相关的表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）相关指标的变化后，观察其对TNBC 细胞增殖和侵袭的影响，并探讨其作用机制，为TNBC 的靶向治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 材料

人TNBC MDA-MB-231 细胞株（CL-0150）购于武汉普诺赛生命科技有限公司；miR-145 无义序列（miR2N0000001-1-1）、miR-145 inhibitors（miR20000）以及引物（miR01101）均由广州锐博生物科技有限公司设计与合成；Leibovitz L-15 培养基（10-045-CVR）购于美国Corning 公司；胎牛血清（A0100-3210）购于德国Cegrogen 公司；实时聚合酶链反应试剂盒（RK21 203）购于武汉爱博泰克生物科技有限公司；Lipofec tamine 2000 试剂（11668027）购于美国Invitrogen 公司；ADAM17（GTX101358）购于美国GeneTex 公司；EGFR抗体（ARG66204）购于上海Arigo 公司。

1.2 细胞培养及分组

使用L-15 完全培养基（含10%胎牛血清和1%双抗）培育本研究的目标细胞，MDA-MB-231 细胞置于37℃、无CO2的饱和湿度培养箱中培养，实验分为空白组（细胞无特殊处理）、miR-145 NC 组（转染miR-145 无义序列）、miR-145 inhibitors 组（转染miR-145 inhibitors）。转染后分析确定各组miR-145 的表达水平以及转染效率。

1.3 实时聚合酶链反应检测各组miR-145 和ADAM17、EGFR mRNA 的表达

细胞转染后继续在细胞培养箱中培养48 h，Trizol 法提取各组的总RNA，利用逆转录试剂盒（锐博生物，ZR102-2）合成cRNA。……