猪圆环病毒2型繁殖与呼吸综合征病毒混合感染诊断

罗布扎西，聂民财，徐志文，周远成

（1.西藏自治区错那县浪坡乡农牧综合服务中心，西藏 错那 856700；2.四川农业大学动物医学院，四川 成都 611130；3.四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川 成都 611130；4.四川省畜牧科学研究院畜禽生物制品四川省重点实验室，四川 成都 610066）

猪圆环病毒是圆环病毒科圆环病毒属的单股环状负链DNA病毒，是目前已知的最小的动物DNA 病毒，主要分为三个血清型，其中2 型的致病力最强。PCV2（圆环病毒2 型）在猪群中传染性较强，能够通过口腔、呼吸道进行传播，怀孕母猪感染后亦可经胎盘引起垂直传播。

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是动脉炎病毒科动脉炎病毒属的单股正链RNA 病毒，PRRSV于1987年首次在美国发现。PRRSV只感染猪，各种日龄、品种的猪都可以感染此病毒，其中日龄在1月以内的仔猪和妊娠母猪最易感。病仔猪以出现呼吸道症状为主，感染母猪则出现繁殖障碍。

1 材料与方法

1.1 病料 病料采集于出现喘气、发烧和腹泻症状的猪，包括患猪的血液、肠系膜淋巴结、脾脏、肺脏以及小肠等。

1.2 试剂与材料 DL 2 000 Marker、dd H2O、Trizol 细胞裂解液、RT-PCR 反转录试剂盒、2×Taq PCR Master Mix，通用型基因组DNA提取试剂盒。

1.3 样品处理 血液样品分装于无菌EP 管中，5 000 r∕min离心5 min，取上清液备用。

淋巴结、脾脏、肺脏和小肠等组织样品剪碎、研磨后加3 mL PBS 制成组织悬液，放置于-20 ℃冻融3次，12 000 r∕min离心5 min，取上清液备用。

1.4 引物设计与合成 根据GenBank 已登录的伪狂犬病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）、流行性腹泻病毒（PEDV）、传染性胃肠炎病毒（TGEV）、轮状病毒（PoRV）、细小病毒（PPV）、δ-冠状病毒（PDCoV）、圆环病毒2 型（PCV2）、繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的基因序列，利用DNAMan 软件分析保守序列并设计引物（表1）。……