应用高通量蛋白芯片技术筛查糖尿病小鼠创面差异蛋白的研究

刘 鹏， 徐 阳， 刘国涛， 周 玉， 王 军

糖尿病（diabetes mellitus，DM）是影响人类生命健康的重大疑难疾病，2013数据显示：全球20～79岁成年人中约有3.82亿糖尿病患者，预计到2035年将达到5.92亿[1]。糖尿病足（DF）作为糖尿病的严重并发症，以创面溃疡经久不愈为主要特点，因糖尿病足溃疡住院治疗的患者住院时间动辄数月，而每次治疗的费用则以万计[2]。而DF发病的具体机制尚未完全阐明，本研究通过高通量芯片技术筛查法，对比糖尿病与正常小鼠创面组织中蛋白因子的差异，探讨糖尿病性创面难愈的可能机制，为临床及基础研究提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物和主要试剂 8周龄SPF级BALB/c小鼠20只，体质量（19.56±1.63）g，购自中国食品药品检定研究院，实验动物许可证号：SCXK（京）2014-0013；高脂高糖饲料成分：基础料72%、猪油18%、蛋黄粉8%、胆固醇2%，购自天津市奥臣实验动物销售有限公司。实验小鼠饲养于标准笼中，环境温度（23±2）℃，空气湿度为50%±10%，光照时间7:00-19:00，自由进食、饮水。将20只小鼠分开饲养，5只/笼。所有动物相关操作均遵循国家及天津中医药大学实验动物学部的有关动物伦理学规定及条例。链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）（美国Sigma公司），通用型组织固定液（武汉赛维尔生物科技有限公司）、Cy3-链霉亲和素（广州瑞博奥公司）、GSMCAA-4000试剂盒（广州瑞博奥公司）。

1.2 方法

1.2.1 糖尿病性创面模型复制 将20只BALB/c小鼠在屏障环境内适应性饲养1周后，每次随机抓取1只小鼠赋予编号；使用随机数字表法挑选出10只作为正常组，余作为糖尿病组。正常组予普通饲料喂养，糖尿病组予高糖高脂饲料喂养，连续4周。……