浅谈复合氨基酸溶液HPLC检测及分析

刘初亮 刘铄佳 刘佳华

广东百试特生物技术研究院有限公司 广东 揭阳 515527

在生命科学研究当中，氨基酸分析是十分关键的一项技术[1]。1958年国外学者先提出了采用离子交换色谱和柱后茚三酮相互结合的方法分析蛋白质水解所形成的氨基酸，提出了早期的氨基酸自动分解技术。在之后的不断发展当中，传统氨基酸分析方法随着高效液相技术、柱载体化学技术等的发展也得到了提升。尤其是在近些年以来，RP-HPLC技术和各种柱前衍生技术相互结合进程的加快，形成了适用性范围更加广泛的氨基酸分析技术。本次研究当中采用HPLC技术检测复合氨基酸溶液中的成分，为后续研究提供参考。大多数的氨基酸不具备荧光发射和吸收特性，采用标准的折射探测仪，在检测氨基酸当中的灵敏度也不够。为了让检测灵敏度得到提升和选择特性分析，通常会把氨基酸衍生化，分为柱前衍生和柱后衍生方法。

1 实验材料及仪器

1.1 样品

所使用到的复合氨基酸溶液样品为广东百试特生物技术研究院有限公司自制，共有三批。

1.2 仪器

高效液相色谱仪为全自动Agilent1200，另外还有超声波清洗器、电子天平等。

1.3 试剂

氨基酸对照品为中国药品生物制品鉴定所提供，其他的化学试剂属于分析纯。

2 方法和结果

2.1 方法

色谱柱为4.6mm×250mm，5µm；流动相为A相为1mol/L乙酸钠水溶液；流动相B相为50%乙腈水溶液。所采用的梯度洗脱模式，流速为1.0ml·min-1，所设定的检测波长为360nm，确定的进样量为20µl，柱温确定为27℃。

2.2 制备样品和对照品

制备对照品时按照样品的处方来进行配置，对照品的计量必须要精密称取，加入适量的水进行超声溶解。……