高海拔不同温度下溺死雄性大鼠玻璃体液内维生素C、次黄嘌呤、谷草转氨酶和尿素的浓度变化与早期死亡时间的关系※

赵 海，于 聪，赵洪乾，李 婷，凌 云，齐佳瑞，陈 亮，吴 岳#

( 1.青海大学医学院，青海 西宁 810001；2.青海省刑事警察总队，青海 西宁 810001)

利用玻璃体液内物质浓度的变化推断死亡时间(postmortem interval，PMI)是近年来的研究热点。本课题探讨在高海拔、不同温度(T)下雄性大鼠溺死后玻璃体液(vitreous humor，VH)中的维生素C(Vit.C)、次黄嘌呤(Hx)、谷草转氨酶(AST)和尿素(Urea)的浓度变化与早期PMI的关系。

1.材料与方法

1.1 实验动物分组及取材方法

1.2 样本检测方法

检测之前将样本在室温下解冻，取玻璃体液200 μL于检测管中，使用美国贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析检测仪检测AST、Urea浓度。用移液枪吸取50 μL玻璃体液于上样瓶中，应用安捷伦1260 Ⅱ高效液相色谱仪检测Vit.C、Hx浓度。

1.2.1 高效液相实验体系

1.2.2 实验标准品的制备方法

Hx的相对分子质量为136.11，用电子天平称量Hx的标准品，用移液枪提取纯水配置0.100、0.050、0.010、0.005mg·mL-1的标准品，用水浴加热溶解。Vit.C的相对分子质量为176.12，用电子天平称量Vit.C的标准品，用移液枪提取纯水配置0.200、0.100、0.050、0.025mg·mL-1的标准品。

1.2.3 Hx标准品高效液相色谱图

Hx标准品高效液相色谱图见图1。

1.2.4 Vit.C标准品高效液相色谱图

Vit.C标准品高效液相色谱图见图2。

图2 VC标准品高效液相色谱图

1.3 统计学方法

实验数据采用SPSS19.0统计软件进行均数及标准差计算、单因素方差分析、Pearson及多元线性回归方程分析，检验水准为α=0.05。

2.结果

2.1 玻璃体液内的AST浓度

大鼠死亡后在不同T条件下，随着PMI的延长VH中AST的变化如表1与图3所示。与对照组相比随着PMI的延长AST浓度呈现先上升后下降的趋势(P<0.05)。0到6 h内AST呈上升趋势，增长率分别为236%、189%、233%，随T上升，AST浓度增长速度先降低后升高。其中0到3 h内上升最快，图3显示其斜率最大。4 ℃组在9 h时上升至最高点，此后逐渐下降，而20 ℃组与30 ℃组则在6 h时开始下降。在死亡9至24 h内AST的浓度在同一时间降低，其中4 ℃温度组下降速度较平缓，而另外两组下降速度更快且随着T的升高下降速度增加，下降速度与T成正比。

表1 大鼠死后不同温度玻璃体液AST浓度的测定结果

2.2 玻璃体液内的Urea浓度

大鼠死亡后在不同T条件下，随着PMI的延长VH中Urea的变化的如表2与图4所示。……