SEPT9基因甲基化、生长分化因子15、糖类抗原199与结直肠癌患者临床病理特征和预后的关系

赵晓慧,李 爽

(北京中医医院顺义医院 检验科,北京,101300)

结直肠癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，临床症状不明显，且呈多样性，故早期诊断困难，多数患者就诊时已发展至中晚期，导致5年生存率较低，病死率高[1]。因此，探寻早期特异性生物学标志物对于提高结直肠癌患者生存率和降低病死率具有重要意义。SEPT9基因甲基化(mSEPT9)在多种恶性肿瘤中过度表达，可作为结直肠癌筛查和预后判断的有效指标[2];生长分化因子15(GDF15)与结直肠癌的进展显著相关，是结直肠癌早期的有效诊断指标[3];糖类抗原199(CA199)是结直肠癌预后的影响因素，对结直肠癌相关转移有预测价值[4]。本研究分析结直肠癌患者mSEPT9、GDF15、CA199表达情况及其与临床病理特征和预后的关系，旨在为结直肠癌的早期诊断和预后判断提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2015年1月—2016年3月北京中医医院顺义医院肛肠科收治的218例住院患者的临床资料，将其中结直肠癌患者106例纳入癌症组，将结直肠腺瘤患者112例纳入腺瘤组。癌症组中，男60例、女46例，平均年龄(62.51±8.36)岁。腺瘤组中，男63例、女59例，平均年龄(62.29±8.61)岁。纳入标准:① 临床资料保存完整，满足研究需求者;② 依从性高且签署入组知情同意书者;③符合结直肠癌诊断标准[5]或结直肠腺瘤的诊断标准，且经术后病理检查确诊者。排除标准:① 合并其他系统恶性肿瘤者;② 合并自身免疫系统疾病者;③ 伴其他胃肠道疾病者;④ 有精神疾病史者。另选取同期体检中心的100例健康体检者纳入对照组，男56例、女44例，平均年龄(62.08±8.76)岁。3组研究对象的一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准备案。

1.2 检测方法

所有研究对象均于空腹8 h以上的次日早晨8点抽取2管静脉血，一管注入EDTA抗凝管(2 mL血)，另一管注入无抗凝剂干燥试管(3 mL血)，颠倒数次混匀，静置30 min后以3 000 转/min速度离心10 min,分离血浆和血清。mSEPT9检测仪器为ABI7500 Fast DxPCR仪，每个样本重复检测3次,3个测试结果中有2个及以上Ct值<45,结果即判定为阳性，反之判定为阴性。GDF15采用酶联免疫吸附法进行检测，试剂盒由美国R&D Systems提供，超过0.5 ng/mL即判定为阳性。CA199采用贝克曼DXI-800全自动化学发光仪及其配套试剂盒进行检测，超过35 U/mL即判定为阳性。所有操作严格按照试剂盒说明书进行，室内质控、阴阳对照均在控。

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 mSEPT9、GDF15、CA199表达情况比较

癌症组mSEPT9阳性率和GDF15、CA199表达水平高于腺瘤组、对照组，且腺瘤组高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 mSEPT9、GDF15、CA199在不同临床病理特征结直肠癌患者中的表达

比较不同临床病理特征结直肠癌患者的mSEPT9、GDF15、CA199表达情况发现,mSEPT9、GDF15、CA199在TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、浸润深度为浆膜层以下、分化程度为低分化、有淋巴结转移及远处转移密切的患者中表达更高，差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、不同性别、不同肿瘤部位、不同肿瘤直径患者的mSEPT9、GDF15、CA199表达情况比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表1 3组mSEPT9、GDF15、CA199表达情况

2.3 mSEPT9、GDF15、CA199与结直肠癌不同病理特征中的相关性分析

纳入差异有统计学意义的临床病理特征进行Pearson 相关性分析，结果显示,mSEPT9、GDF15、CA199与TNM分期、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、远处转移显著相关(P<0.05)。见表3。

2.4 影响结直肠癌患者预后的单因素回归分析

根据结直肠癌患者的临床病理特征进行分组，进行COX单因素回归分析，结果显示，临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、浸润深度为浆膜层以下、分化程度为低分化、淋巴结转移、远处转移以及mSEPT9、GDF15、CA199阳性表达是结直肠癌患者预后不良的影响因素(P<0.05)。见表4。

2.5 影响结直肠癌患者预后的多因素回归分析

以COX单因素回归分析中具有统计学意义的指标作为自变量，以生存结局(其中生存=0，死亡=1)和生存时间为因变量，进行COX多因素回归分析。结果显示，临床分期高、分化程度低、淋巴结转移、远处转移以及mSEPT9、GDF15、CA199阳性表达是结直肠癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。见表5。

3 讨 论

早期结直肠癌患者的5年生存率可超过90%,但由于发病初期症状不明显，加之缺乏有效的检测手段，很多结直肠癌患者就诊时已处于中晚期，错过了最佳治疗时机，而晚期结直肠癌患者的5年生存率不足12%[6]。目前，结直肠癌的筛查手段以粪便潜血试验和肠镜检查为主。粪便潜血试验虽然快速、无创、经济，但易受到其他因mSEPT9:SEPT9基因甲基化;GDF15:生长分化因子15;CA199:糖类抗原199。

表2 mSEPT9、GDF15、CA199在不同临床病理特征结直肠癌患者中的表达

表3 mSEPT9、GDF15、CA199与结直肠癌不同病理特征的相关性分析

表4 影响结直肠癌患者预后的单因素回归分析[n(%)]

表5 影响结直肠癌患者预后的多因素回归分析

素影响，假阳性率高[7]。肠镜是结直肠癌确诊的金标准，但部分患者存在行动不便或依从性差的情况，高危人群的筛查率不足20%[8]。肿瘤标志物具有快速、安全、无创等优点，已被越来越多地应用于肿瘤的筛查、诊断及预后判断中。

SEPT9是septin基因家族的成员之一，位于染色体17q25.3上，在细胞分裂末期起重要作用。SEPT9能够编码SEPT9蛋白从而防止细胞过快分裂或不受控制，当SEPT9启动区域甲基化时，可阻止SEPT9蛋白表达，诱发结直肠癌的发展，此时mSEPT9则会从坏死性和凋亡性癌细胞中脱落释放入血，导致含量升高[9]。冷霞等[10]研究表明，随着结直肠癌病情进展,mSEPT9明显升高，故可作为结直肠癌的敏感肿瘤标志物。GDF15是转化生长因子β超家族成员，在健康人体内低表达。机体缺氧、炎症、肿瘤等病理过程中,GDF15不仅能发挥早期抑癌、晚期促癌的作用，还能通过多种途径干扰细胞参与免疫应答，影响肿瘤免疫调节[11]。CA199是一种唾液酸衍生物，在血清中以唾液黏蛋白形式存在，于胆囊、胰腺、胃肠道黏膜等正常组织中可检测到，其血液浓度升高往往预示疾病恶化，可用于胰腺癌、结直肠癌的检测[12]。本研究结果显示,mSEPT9、GDF15、CA199表达在结直肠癌患者中显著升高，表明这些指标可能与疾病的发生、发展密切相关。曹亚萍等[13]报道,mSEPT9与CEA、CA199等肿瘤标志物联合检测适用于结直肠癌的非侵入性诊断。邱智宇[14]也指出，GDF15等可溶性蛋白检测可以建立准确的肿瘤筛查预测模型，进一步提高结直肠癌的早诊率。

本研究发现,mSEPT9、GDF15、CA199表达在TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、浸润深度为浆膜层以下、分化程度为低分化、有淋巴结转移及远处转移密切的患者中显著升高，进一步行Pearson 相关性分析发现,mSEPT9、GDF15、CA199与TNM分期、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、远处转移显著相关(P<0.05)。TNM是恶性肿瘤的分期系统，与疾病进展相关，分期越高则肿瘤恶性程度越高，血清肿瘤标志物水平也越高[15];结直肠癌患者的病死率和生存率与浸润深度密切相关，浸润越深，恶性程度越高，病死率越高，可根据浸润深度进行病情诊断[16];肿瘤分化程度越低，肿瘤恶性程度越高，相应肿瘤标志物水平也越高[17];当肿瘤细胞浸润到黏膜下层时就可能进入淋巴管而发生淋巴结转移，浸润深度越深，发生淋巴结转移的风险越大[18]。侵袭性转移是恶性肿瘤的重要生物学特征，发生远处转移者一般已进展至中晚期，病情严重，预后也较差。因此，临床医生可通过检测mSEPT9、GDF15、CA199来了解患者的临床病理特征和转移情况，并对患者的病情进展和预后进行评估。

本研究发现，临床分期高、分化程度低、淋巴结转移、远处转移以及mSEPT9、GDF15、CA199阳性表达是结直肠癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05),与张煌等[19]研究结论相符，证实mSEPT9、GDF15、CA199阳性表达与结直肠癌的发生、进展及预后密切相关。

综上所述，结直肠癌患者mSEPT9、GDF15、CA199表达显著升高，且与不同临床病理特征密切相关,mSEPT9、GDF15、CA199阳性表达是患者预后不良的独立危险因素，临床应加强干预，以改善患者预后，提高其生存率。但本研究样本量较小，且病例均来自一家医院，可能存在一定选择偏倚，有待日后进行大样本量、多中心研究来验证结论的准确性，从而为结直肠癌的早期诊断及预后判断提供参考依据。