赤峰市售小麦粉交链孢霉毒素污染研究

代永霞 李萌萌 刘清涛

（赤峰市疾病预防控制中心，内蒙古赤峰 024000）

交链孢霉毒素是由交链孢霉产生的一类有毒代谢产物，常污染水果及其制品、谷物及其制品等。目前已知的具有明显毒性的交链孢霉毒素有70多种[1]，交链孢酚（AOH）、交链孢酚单甲醚（AME）是主要代谢产物，分布最广，而且产生的毒性有协同作用，具有遗传毒性[2]和致突变性[3]。TeA与其他真菌毒素会产生急性毒性作用，于1979年被列入美国国家职业安全与卫生研究所的《有毒化学物质登记册》。TeA无诱变性，但能抑制氨基酸聚合，阻止蛋白质和DNA的合成，干扰核糖体释放新的蛋白质[4]。TEN具有植物毒性，对某些物种有针对性萎黄病[5]，TEN被认为是ATP合成终端的能量传递抑制剂，能抑制光合磷酸化[6]。

交链孢霉毒素的毒性作用已引起业界关注，交链孢霉毒素对人食道上皮细胞的作用机理已有报道，是我国林县地区食道癌高发的潜在原因之一[7]。由于交链孢霉能在低温下生长，因而也是造成冷藏条件下贮存和运输的食品腐败变质的重要原因[8]。食品中交链孢霉毒素的污染已成为一个重要的公共卫生问题。我国尚缺乏系统、完整和准确的各类食品中交链孢霉毒素的污染水平资料。获取各类食品中交链孢霉毒素污染水平数据，并结合人类膳食消费量资料进行我国居民膳食暴露该类毒素的风险评估，是对未来研究具有促进性的课题，也是目前和未来的研究重点。本文对4种交链孢霉毒素在小麦粉中污染进行分析，以期加强交链孢霉毒素的预防及监测工作，保障人们的主食安全。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 试验仪器。安捷伦液质联用仪，美国Organo-mation氮吹仪，杰尔森固相萃取仪,赛默飞高速冷冻离心机，上海之信仪器有限公司生产的超声波提取器，梅特勒-托利多仪器有限公司生产的电子天平。

1.1.2 试验试剂。乙腈（MREDA色谱纯），甲醇（TED IA色谱纯），无水磷酸二氢钠（优级纯，国药），磷酸（优级纯，国药），碳酸氢铵（优级纯，国药）；细交链孢菌酮酸（TeA）、交链孢酚（AOH）、腾毒素（TEN）、交链孢酚单甲醚（AME）同位素内标液；细交链孢霉菌酮酸-13C2（TeA-13C2）；0.05 mol/L 磷酸二氢钠溶液；样品提取液（450 mL乙腈和100 mL甲醇加到450 mL 0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液中，混匀）；1.0 mmol/L碳酸氢铵溶液。

1.2 试验方法

1.2.1 样品制备及提取。选取赤峰市售小麦粉为试验材料，准确称取混匀样品 5 g，加入100 μL 1.0 μg/mL内标液，加入25 mL样品提取液，漩涡混匀30 s，超声处理20 min，冷却至室温，于10 000 r/min、低温（4℃）条件下离心10 min，准确吸取上清液5 mL于另一个50 mL离心管中，加入15 mL磷酸二氢钠溶液，漩涡混匀，固相萃取柱（SPE）净化后，以 Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）为分析柱，以0.15 mmol/L碳酸氢铵水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱，以负离子电喷雾模式电离（ESI-），多反应离子监测方式进行定性及定量检测。同时做空白试验。

1.2.2 基质加标工作曲线的绘制。称取6份空白样品，每份5.0 g，按样品处理步骤提取净化，洗脱液氮吹至近干，准确加入混合标准工作液和同位素内标工作液（1.0 μg/mL），用10%甲醇溶液配制成基质加标工作曲线。将基质加标工作曲线溶液上机测定，得到4种交链孢霉毒素及同位素内标的色谱图和峰面积，以TeA浓度为横坐标，以TeA与TeA-13C2的峰面积之比为纵坐标，绘制工作曲线；分别以AOH、TEN和AME的浓度为横坐标，以AOH、TEN和AME的峰面积为纵坐标，绘制AOH、TEN和AME的工作曲线。

2 结果与分析

2.1 4种交链孢霉毒素的检出量

由表1可知，4种交链孢霉毒素的检出量明显不同，交链孢菌酮酸（TeA）检出量明显高于其他3种交链孢霉毒素。

表1 4种交链孢霉毒素检测结果 单位：（μg·kg-1）

2.2 4种交链孢霉毒素的检出率

从表2可以看出，腾毒素（TEN）的检出率最高，为100%；交链孢酚（AOH）和交链孢酚单甲醚（AME）的检出率为96.7%；交链孢菌酮酸（TeA）的检出率为90%。不同监测地区样品中同一种交链孢霉毒素检出率也不同：交链孢菌酮酸（TeA）在不同地区检出率有统计学意义（P＜0.005）；交链孢酚（AOH）在不同地区检出率无统计学意义（P＞0.25）；腾毒素（TEN）检出率均为100%，不同地区无差异；不同地区交链孢酚单甲醚（AME）检出率无统计学意义（P＞0.05）。

表2 4种交链孢霉毒素的检出率 单位：%

3 结论与讨论

共检测120份小麦粉样品，其中TeA检出率为90%，TEN检出率为100%，AOH和AME的检出率均为96.7%。赤峰市售小麦粉中交链孢菌酮酸（TeA）、交链孢酚（AOH）、腾毒素（TEN）和交链孢酚单甲醚（AME）4种交链孢霉毒素污染率很高，应该引起相关部门的高度重视。

有研究表明，小麦粉虽然被交链孢霉污染了、有产生交链孢霉毒素的潜力，但并不一定有交链孢霉毒素检出。因此，从产品分离到交链孢霉并不意味着一定可检测到毒素[8]。交链孢霉毒素的污染水平和稳定性受温度、压力、湿度、不同食品基质的影响，因而可以通过改善贮存、运输条件，改变加工工艺如温度、压力、酸度、时间等减少交链孢霉毒素[10]。依托各级食品安全风险监测平台，进一步扩大样本数量，在大数据的基础上完善和修订国家标准，才能最大限度降低小麦粉中交链孢霉毒素污染程度。