金华地区汉族人群CYP2C19基因多态性的分布特征

陈红芳 潘小玲 程兴 张美霞 潘昕然

氯吡格雷是一种噻吩吡啶的前体药物，需要通过肝脏中的细胞色素P450（cytochrome P450，CYP450）酶介导生成有活性代谢物，从而选择性和不可逆地阻断P2Y12受体，进而抑制血栓形成[1]。目前氯吡格雷已成为临床常用的抗血小板聚集药物之一，是预防和治疗急性冠状动脉综合征、脑梗死等缺血性事件的基石[2]。但研究发现，许多因素对氯吡格雷的反应性造成影响，如患者依从性、肥胖、糖尿病等，其中最重要的是CYP2C19基因多态性，可改变CYP450酶的活性，直接参与氯吡格雷转化为活性代谢物的过程。目前已知CYP2C19至少有34个等位基因变异，其中CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17最为常见[3-4]。CYP2C19*2（C.681G＞A；rs4244285）、CYP2C19*3（C.636G＞A；rs4986893）是功能缺失等位基因，可导致CYP450酶活性的减少或完全丧失，从而抑制氯吡格雷代谢；而CYP2C19*17（C.-806C＞T；rs12248560）是功能增益等位基因，可增强氯吡格雷代谢和出血风险[5-6]。目前，临床药物遗传学实施指南根据个体对氯吡格雷的代谢不同，将CYP2C19基因代谢表型分为超快代谢型（ultra-extensive metabolizers，UM）（1*/17*、17*/17*）、快代谢型（extensive metabolizers，EM）（1*/1*）、中间代谢型（intermediate metabolizers，IM）（1*/2*、1*/3*、2*/17*、3*/17*）、慢代谢型（poor metabolizers，PM）（2*/2*、2*/3*、3*/3*）四类[7]。研究发现，CYP2C19基因多态性具有显著的地域和种族差异[8]。因此，本研究对金华地区527例汉族人群的CYP2C19基因多态性进行检测与分析，以期为指导该地区心脑血管疾病患者个体化精准诊疗提供参考。

1 对象和方法

1.1 对象选取2017年9月至2021年2月就诊于浙江大学医学院附属金华医院且拟用氯吡格雷治疗的527例患者为研究对象，其中男325例，女202例；年龄24~97（64.86±12.99）岁；冠心病294例，缺血性脑卒中233例。纳入标准：（1）金华户籍；（2）汉族；（3）无血缘关系；（4）冠心病、缺血性脑卒中的患者。排除标准：（1）有家族性遗传病史；（2）半年内有手术输血史；（3）合并恶性肿瘤；（4）患有血液系统相关疾病。本研究经本院医学伦理委员会审查通过[批准文号：（2021）伦审第（32）号]，所有患者知情同意。

1.2 主要试剂与仪器全血基因组DNA提取试剂盒（西安天隆科技有限公司），飞行时间质谱检测试剂iPLEX Pro Reagents（美国Agena Bioscience公司）；DP-TOF型飞行时间质谱检测系统（浙江迪谱诊断技术有限公司），NP968-C型核酸提取仪（西安天隆科技有限公司），Nanodrop 2000分光光度计（美国Thermo Fisher Scientific公司），Veriti 96聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）仪（美国Applied Biosystems公司），Sorvall ST 16R Centrifuge离心机（美国Thermo Fisher Scientific公司），Vortex-Genie 2漩涡混合器（美国Scientific Industries公司），移液枪（德国Eppendorf公司）。

1.3 CYP2C19基因型检测抽取患者清晨空腹静脉血2 mL，经全血基因组DNA提取试剂盒进行DNA的提取和纯化后，使用飞行时间质谱检测平台对CYP2C19基因的3个位点进行检测，加样量为2 μL。具体检测步骤如下：（1）多重PCR。PCR扩增目标序列（单次反应最多可获取40个基因片段）。（2）单碱基延伸。加入针对单核苷酸多态性位点的特异性单碱基延伸引物，通过PCR在单核苷酸多态性位点上延伸1个碱基。（3）脱盐点样。样品分析物经过树脂脱盐后将其点在芯片基质上形成共结晶。（4）质谱检测。共结晶在质谱仪的真空管内经强激光激发、核酸分子分解并吸附为单电荷离子。检测器将信号转化为可视化的峰图，利用软件自动分析对应的碱基类型并得到结果。

1.4 统计学处理采用SPSS 23.0统计软件。采用Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验样本的群体代表性；计数资料组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CYP2C19等位基因发生频率及Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验527例患者中，CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP2C19*17等位基因发生频率分别为33.40%、4.08%、0.38%；经Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验，提示本组患者具有群体代表性（P＞0.05）。

2.2 CYP2C19基因型及代谢表型频率CYP2C19基因型以1*/2*（42.88%）、1*/1*（37.76%）多见，而2*/17*（0.19%）、1*/17*（0.57%）较为少见；代谢表型以IM（48.38%）、EM（37.76%）多见，而UM（0.57%）较为少见，见表1。

表1 CYP2C19基因型及代谢表型频率[例（%）]

2.3 不同性别患者CYP2C19基因型及代谢表型频率比较不同性别患者CYP2C19基因型及代谢表型频率比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表2。

表2 不同性别患者CYP2C19基因型及代谢表型频率比较[例（%）]

2.4 不同年龄患者CYP2C19基因型及代谢表型频率比较将527例患者分为3个年龄段：＜55岁116例，55~75岁280例，＞75岁131例。不同年龄患者CYP2C19基因型及代谢表型频率比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表3。

表3 不同年龄患者CYP2C19基因型及代谢表型频率比较[例（%）]

3 讨论

氯吡格雷是目前临床上常用的抗血小板聚集药物，但其药物反应性具有一定的个体差异，不少患者存在氯吡格雷反应性低的现象，导致血栓事件发生风险增加[9]。随着药物基因组学研究的飞速发展[10-11]，个体化用药相关基因多态性检测可有助于个体化治疗药物的选择，以减少主要不良心血管事件的发生风险。目前已知CYP2C19基因不仅在氯吡格雷的CYP450酶代谢中起重要作用，也是参与氯吡格雷代谢最主要的遗传因素[12-13]。CYP2C19基因在人群中呈现多态性分布，不同基因型会影响肝P450酶的活性，从而影响氯吡格雷在人体内的疗效及不良反应[14]。因此，探讨CYP2C19基因多态性对金华地区心脑血管疾病患者的合理化用药具有重要临床意义。

本研究对金华地区527例汉族人群的CYP2C19基因多态性进行检测与分析，结果显示CYP2C19*2（33.40%）等位基因发生频率高于CYP2C19*3（4.08%）、CYP2C19*17（0.38%），这与Ma等[15]研究结果一致。进一步分析发现，代谢表型为IM、PM的患者所占比例分别为48.38%、13.29%，即表现为氯吡格雷生物利用度低、抗血小板作用弱的患者比例高达61.67%，这表明金华地区汉族人群中约62%存在不同程度的氯吡格雷抵抗现象，这与池宏波等[16]在台州地区的研究结果相仿。研究表明，这两类人群发生主要不良心血管事件的风险明显增加[7]。此外，Lan等[17]研究发现，CYP2C19基因多态性与氯吡格雷治疗脑梗死的临床疗效密切相关，提示根据氯吡格雷的药物代谢状态不同，积极调整患者个体化治疗方案是有必要的。根据CYP2C19基因分型，临床药物遗传学实施指南对患者进行氯吡格雷治疗给出了明确的建议[18]。根据这些建议，在没有禁忌证的情况下，对IM（1*/2*、1*/3*、2*/17*）、PM（2*/2*、2*/3*、3*/3*）患者，需要改用其他抗血小板药物（如普拉格雷、替格瑞洛等）进行治疗；对于基因型为1*/17*、17*/17*、1*/1*的患者，则可以使用推荐剂量的氯吡格雷进行治疗[19]。本研究还比较了不同性别、年龄患者的基因型及代谢表型频率，结果发现性别、年龄对基于CYP2C19基因多态性的个体化精准诊疗影响不大，与林小青等[20]研究结果一致。

综上所述，金华地区汉族人群CYP2C19基因多态性存在个体差异，以CYP2C19*2等位基因突变多见，基因型以1*/2*居多，代谢表型以IM居多；患者性别、年龄对基于CYP2C19基因多态性的个体化精准诊疗影响不大。