天麻素对神经母细胞瘤细胞突触相关蛋白表达的影响*

江沂， 刘燕娣， 刘婉， 陈海敏

(广州医科大学附属中医医院 病理科， 广东 广州 510130)

阿尔茨海默氏病(alzheimer’s disease，AD)是老年性痴呆最常见类型之一，以认知和记忆功能进行性减退为主要临床特征，其主要病理特征包括细胞外β淀粉样蛋白(β amyloid protein, Aβ)沉积形成的老年斑(senile plaque, SP)、细胞内tau蛋白过度磷酸化形成的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)及脑萎缩[1]。Aβ的聚集是AD发生和发展的核心因素，可直接或间接破坏突触的结构和功能，引起突触功能障碍和突触丢失[2-3]。突触正常功能的发挥及可塑性的维持与突触相关蛋白密切相关，已知突触相关蛋白主要有突触素(synapsin, SYN)、突触后致密蛋白95(postsynaptic density of 95, PSD95)、发动蛋白1(dynamin, DYN1)等[4]。天麻(gastrodiae rhizome, GR)是我国珍贵的药食同源中药，天麻素(gastrodin, GAS)、香荚兰醇(vanillyl alcohol)、香荚兰醛(vanillin)是其有效化学成分，大约在两千多年前就被神农草药经典所记载，具有脑神经保护作用。有关GAS的研究表明，其药理效应众多，包括增强认知功能、抗炎、抗氧化、抗抑郁和抗焦虑等，且无其它不良反应[5-6]。本研究以人神经母细胞瘤(neuroblastoma cell, SH-SY5Y)细胞为研究对象，采用安全浓度的GAS单独或联合Aβ1-42处理，观察处理后突触相关蛋白SYN、DYN1及PSD95 mRNA及蛋白表达改变，探讨GAS对神经细胞突触蛋白水平的影响及其神经保护作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

GAS购买自贵州益康制药有限公司，经鉴定符合企业内控标准；SH-SY5Y细胞购于德国German Collection of Microorganisms and Cell Cultures公司，鼠抗β-肌动蛋白(β-actin)多克隆抗体、HRP标记的抗兔、抗鼠二抗购自美国Santa Cruz Biotechnology Inc公司。兔抗Synaptophysin多克隆抗体(ab32594)购自美国Abcam公司；兔抗PSD95多克隆抗体(GTX133091)、兔抗DYN1多克隆抗体(GTX110379)购自美国Gene Tex公司；SYN、DYN1、PSD95及β-actin的引物均由上海生物工程有限公司设计并合成。……